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中級會(huì)員 | 第14年

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標(biāo)準(zhǔn)品
培養(yǎng)基
培養(yǎng)基原料 霍亂弧菌診斷血清 大腸艾希氏菌診斷血清 志賀氏菌屬診斷血清 沙門氏菌屬診斷血清 標(biāo)準(zhǔn)血清,診斷血清 抗生素藥敏紙片 微生物配套試劑 微生物生化管 管裝培養(yǎng)基 即用型液體培養(yǎng)基 一次性培養(yǎng)基平板 顯色培養(yǎng)基 臨床培養(yǎng)基 菌種保存培養(yǎng)基 四環(huán)素檢定、厭氧亞硫酸鹽還原桿菌檢測培養(yǎng)基 維生素檢測培養(yǎng)基 一次性衛(wèi)生用品衛(wèi)生檢測培養(yǎng)基 罐頭食品商業(yè)無菌檢測培養(yǎng)基 飲用水及水源檢測培養(yǎng)基 藥品、生物制品檢測培養(yǎng)基 化妝品檢測培養(yǎng)基 動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基 啤酒檢驗(yàn)培養(yǎng)基 軍團(tuán)菌檢測培養(yǎng)基 支原體檢測培養(yǎng)基 小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 彎曲桿菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 產(chǎn)氣莢膜梭菌、肉毒梭菌、厭氧菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 阪崎腸桿菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 溶血性鏈球菌檢測培養(yǎng)基 李斯特氏菌檢測培養(yǎng)基 弧菌檢測培養(yǎng)基 乳酸菌、雙歧桿菌檢測培養(yǎng)基 酵母、霉菌檢測培養(yǎng)基 檢測培養(yǎng)基 沙門氏菌、志賀氏菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 大腸菌群、糞大腸菌群、大腸桿菌及腸桿菌科檢測培養(yǎng)基 細(xì)菌總數(shù)檢測,增菌培養(yǎng)基
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DNA的限制性核酸內(nèi)切酶酶切實(shí)驗(yàn)和連接實(shí)驗(yàn)

時(shí)間:2016-7-6閱讀:760
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酶切實(shí)驗(yàn)

本實(shí)驗(yàn)學(xué)習(xí)用限制性核酸內(nèi)切酶(Restriction endonuclease)EcoRI 切割λDNA及質(zhì)粒pBR322DNA,瓊脂糖凝膠電泳后觀察酶切結(jié)果。

【原理】

λDNA 是大腸桿菌的一種溫和噬菌體DNA,雙股線狀,分子大小為48.5 kb。 EcoRI酶可識(shí)別DNA中 G↓AATTC核苷酸序列,并在箭頭處將其切開。λDNA含有5個(gè)EcoRI酶識(shí)別位點(diǎn),可將λDNA切成6個(gè)大小不同的片斷。pBR322 DNA為人工構(gòu)建的質(zhì)粒dna, 分子大小為4.3 kb,含有1個(gè)EcoR I酶切點(diǎn),切割后由環(huán)狀DNA變?yōu)榫€形DNA。

【材料】

1.λDNA(0.1ug/ul),pBR322 DNA(0.25 ug/ul)

2.限制性內(nèi)切酶EcoRI

3.EcoRI 酶切緩沖液(Buffer solution 10×)

4.去離子水

5.電泳及染色用材料

【方法】

1.取潔凈EP管2只,按表10-1加入各成分。

2.混勻,放370C水浴1-2h。65℃水浴10min,再放4℃冰箱8min終止反應(yīng)。部分酶切DNA片段用于DNA連接實(shí)驗(yàn),另一部分放4℃冰箱,待瓊脂糖凝膠電泳檢測。

(二)DNA連接實(shí)驗(yàn)

T4 DNA 連接酶是一單鏈多肽,分子量為68,000道爾頓,它能催化雙鏈DNA上相鄰的3ˊ羥基和5ˊ磷酸末斷形成磷酸二脂鍵。λDNA用EcoRI酶切割后形成的6個(gè)片斷均具有粘性末端(Cohesive ends),在T4 DNA 連接酶作用下,可連接成原來的線狀DNA

【材料】

1.λDNAEcoRI酶切片段

2.T4 DNA連接酶

3.T4 DNA連接酶緩沖液(10×)

4.去離子水

【方法】

1.取潔凈EP管1只,分別加入:

①去離子水 7ul,

②T4 DNA連接酶緩沖液(10×) 2 ul,

③λDNA酶切片段(已65℃10分鐘滅活)10ul

④T4 DNA連接酶1ul

2.混勻后,放13℃水浴過夜,待電泳檢測。

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