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細胞分裂指數(shù)測定

時間:2014/11/21閱讀:709
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一、原理

體外培養(yǎng)細胞生長、分裂繁殖的能力,可用分裂指數(shù)來表示。它與生長曲線有一定的,如隨著分裂指數(shù)的不斷提高,細胞也就進入了指數(shù)生。

分裂指數(shù)指細胞群體中分裂細胞所占的百分比,它是測定細胞周期的一個重要指標,也是不同實驗研究選擇細胞的重要依據(jù)。

二、儀器、用品與試劑

1、儀器與用品:CO2培養(yǎng)箱、普通顯微鏡、細胞培養(yǎng)血、蓋玻片、吸管

2、試劑:培養(yǎng)液、、甲醇、冰醋酸、Giemsa染液

三、操作步驟

1、消化細胞,將細胞懸液接至內(nèi)含蓋玻片的培養(yǎng)皿中。

2、CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時,使細胞長在蓋片上。

3、取出蓋片,按下列順序操作:

PBS漂洗3分鐘→甲醇:冰醋酸=3:1固定液中固定30分鐘→Giemsa液染色10分鐘→自來水沖洗。

4、蓋片晾干后反扣在載玻片上,鏡檢。

5、計算:

分裂指數(shù)=分裂細胞數(shù)/總細胞數(shù)×

四、注意事項

操作時動作要輕,以免使蓋片上的細胞脫落。

附:Giemsa染液配制:

稱Giemsa粉末0.5克,加幾滴甘油研磨,再加入甘油(使加入的甘油總量為33ml)。56℃中保溫90-120分鐘。加入33ml甲醇,置棕色瓶中保存,此為Giemsa原液。

使用時按要求用PBS稀釋。一般稀釋10倍。

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