一、Chelex-100法提取生物檢材中的DNA
Chelex 100能有效除去非核酸有機(jī)物，主要用于提取全血或血痕、精液或精斑、混合斑、毛發(fā)、培養(yǎng)細(xì)胞等。但因生物樣本來(lái)源不同其操作方法有所差異，以下分別介紹:
（一）全血
（1）取3～10μl全血加到0.5ml離心管中，加人500μl純水，劇烈振蕩，室溫下放置15分鐘。
（2）13,000rpm離心3分鐘，去上清，收集沉淀。（必要時(shí)可用蒸餾水反復(fù)洗沉淀物，直至無(wú)色或血色素很少）。
（3）沉淀中加入200μl 5% Chelex-100溶液（5% Chelex-100為懸濁液，使用前要充分振搖，使Chelex-100顆粒懸浮），在振蕩器上反復(fù)振蕩，放入56℃保溫30分鐘以上。
（4）取出后振蕩，100℃保溫8分鐘，振蕩后，13,000rpm離心3分鐘，上清用于pcr擴(kuò)增，或放4℃保存?zhèn)溆谩?/p>
（二）血斑
（1）剪取約0.5cm2的血斑，加到0.5ml的離心管中，加入500μl純水，劇烈振蕩，室溫放置15分鐘。13,000離心3分鐘，去上清。（可用純水反復(fù)洗至無(wú)色，載體不需去除，始終留在離心管中。）
（2）以下步驟同全血的提取方法。
（三）混合斑
（1）取適量含有混合斑的檢測(cè)，剪碎后放入5ml小燒杯中，加入3ml純水、300μl 10% SDS及150μl 5mg/ml 的PK酶，用牙簽攪拌后，放入37℃水浴6小時(shí)以上（過(guò)夜）。
（2）將水浴好的檢材移入1.5ml離心管（檢材載體用一次性注射器擠壓后去除），13,000rpm 離心3分鐘，去上清，每管加1.4ml 純水，振蕩，13000rpm 離心3分鐘。洗三次后，移入0.5ml離心管中，13000rpm離心3分鐘，棄上清。
（3）向沉淀物的離心管中加入200μl 5%的Chelex-100（可根據(jù)檢材量的多少進(jìn)行調(diào)節(jié)），4μl 5mg/ml 的PK酶及8μl 1M的DTT（PK酶及DTT的終濃度分別為100μg/ml和0.039M），振蕩后56℃保溫過(guò)夜。次日取出振蕩，100℃保溫8分鐘，振蕩，13000rpm離心3分鐘，上清用于PCR擴(kuò)增或放4℃保存?zhèn)溆谩?/p>
（四）含有唾液斑的檢材
（1）唾液斑：處理方法與血斑的處理方法相同。
（2）煙頭：用鑷子夾住煙頭，剪刀剪下煙頭外圈的紙，剪碎后放入0.5ml離心管中，加人500μl純水，劇烈振蕩，13000rpm離心3分鐘，棄上清，加入100μl 5% 的Chelex-100，放入56℃保溫30分鐘以上。取出振蕩，100℃保溫8分鐘，13000rpm離心3分鐘，上清用于PCR擴(kuò)增或放4℃保存?zhèn)溆谩?/p>
（3）口香糖：將口香糖剪碎后放入0.5ml離心管中，加人500μl純水，劇烈振蕩，13000rpm離心3分鐘，棄上清，加入100μl 5% 的Chelex-100，放入56℃保溫30分鐘以上。取出振蕩，100℃保溫8分鐘，振蕩，13000rpm離心3分鐘，上清用于PCR擴(kuò)增或放4℃保存?zhèn)溆谩?/p>
（五）毛根
用鑷子夾住毛發(fā)的根部，剪去其余部分，將毛根放入0.5ml離心管中（處理毛發(fā)時(shí)很容易遺失，應(yīng)小心操作，在桌面上鋪一張白紙。），加人純水洗一次，然后加入30μl 5%的Chelex-100和2μl 5mg/ml 的PK酶，放入56℃保溫6小時(shí)以上。取出振蕩，100℃保溫8分鐘，振蕩，13000rpm離心3分鐘，上清用于PCR擴(kuò)增或放4℃保存?zhèn)溆谩?/p>
（六）肌肉與腦組織
取小米粒大小的肌肉或腦組織，放入0.5ml離心管中，加人純水洗一次，然后加入200μl 5%的Chelex-100和 5μl 5mg/ml 的PK酶，放入56℃保溫3小時(shí)以上。取出振蕩，100℃保溫8分鐘，振蕩，13000rpm離心3分鐘，上清用于PCR擴(kuò)增或放4℃保存?zhèn)溆谩?/p>
二、鹽析法
（一）試劑
TE緩沖液（TE Buffer）
紅細(xì)胞裂解液RCLB
DSP work solution：DSP stock solution 980μl
蛋白酶K（10mg/ml） 15μl
Tween-20 5μl
（二）操作步驟
1）取100μl全血置于1.5ml EP管中。
2）加500μl TE緩沖液，充分混勻，靜置5分鐘。
3） 13，000 rpm離心2分鐘，用無(wú)菌分液管移棄上清液。
4）加500μl TE緩沖液，重復(fù)步驟②和③一遍。
5）加紅細(xì)胞裂解液（RCLB）500μl，重度步驟②和③兩遍。
6）zui后一次RCLB洗滌時(shí)，移去上清液，加入100μl DSP工作液，充分混勻，直至沉積塊破碎。
7）56℃干熱器孵育2小時(shí)。
8）混勻，95℃干熱器孵育10分鐘。
9）加35μl高氯酸鈉，混勻后13，000rmp離心5分鐘，小心吸取上清液移至另一Ep管中。
10）加2.5倍體積冷無(wú)水乙醇，沉淀DNA，12，000rmp離心8分鐘，棄上清液。
11）加入1ml 70%乙醇洗滌DNA，10，000rmp離心5分鐘，棄上清液。
置超凈工作臺(tái)內(nèi)自然干燥后，加入100μl ddH2O，置4℃保存待用。
