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上海士鋒生物科技有限公司
中級(jí)會(huì)員 | 第14年

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標(biāo)準(zhǔn)品
培養(yǎng)基
培養(yǎng)基原料 霍亂弧菌診斷血清 大腸艾希氏菌診斷血清 志賀氏菌屬診斷血清 沙門氏菌屬診斷血清 標(biāo)準(zhǔn)血清,診斷血清 抗生素藥敏紙片 微生物配套試劑 微生物生化管 管裝培養(yǎng)基 即用型液體培養(yǎng)基 一次性培養(yǎng)基平板 顯色培養(yǎng)基 臨床培養(yǎng)基 菌種保存培養(yǎng)基 四環(huán)素檢定、厭氧亞硫酸鹽還原桿菌檢測(cè)培養(yǎng)基 維生素檢測(cè)培養(yǎng)基 一次性衛(wèi)生用品衛(wèi)生檢測(cè)培養(yǎng)基 罐頭食品商業(yè)無菌檢測(cè)培養(yǎng)基 飲用水及水源檢測(cè)培養(yǎng)基 藥品、生物制品檢測(cè)培養(yǎng)基 化妝品檢測(cè)培養(yǎng)基 動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基 啤酒檢驗(yàn)培養(yǎng)基 軍團(tuán)菌檢測(cè)培養(yǎng)基 支原體檢測(cè)培養(yǎng)基 小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 彎曲桿菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 產(chǎn)氣莢膜梭菌、肉毒梭菌、厭氧菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 阪崎腸桿菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 溶血性鏈球菌檢測(cè)培養(yǎng)基 李斯特氏菌檢測(cè)培養(yǎng)基 弧菌檢測(cè)培養(yǎng)基 乳酸菌、雙歧桿菌檢測(cè)培養(yǎng)基 酵母、霉菌檢測(cè)培養(yǎng)基 檢測(cè)培養(yǎng)基 沙門氏菌、志賀氏菌檢驗(yàn)培養(yǎng)基 大腸菌群、糞大腸菌群、大腸桿菌及腸桿菌科檢測(cè)培養(yǎng)基 細(xì)菌總數(shù)檢測(cè),增菌培養(yǎng)基
抗體
生物試劑
細(xì)胞
菌株
血清
細(xì)胞分離試劑
試劑盒

士鋒生物離子交換柱層析法分離可溶性蛋白的操作規(guī)范

時(shí)間:2013/8/28閱讀:766
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通常,可溶性蛋白可通過離心、鹽析、電泳和層析來分離。本文介紹可溶性蛋白離子交換柱層析操作規(guī)程:包括了裝柱、柱的平衡與上樣、洗雜蛋白、解離目的蛋白以及柱的清洗與保存操作規(guī)范。

1.裝柱:

1.1 取出層析柱,用去離子水沖洗干凈,連接好管子后固定柱子;

1.2用水沖洗層析柱3-5次,每次10ml去離子水;

1.3取出填料,靜止至室溫后,根據(jù)需要用移液器取出3-5ml的填料進(jìn)行裝柱,

1.4用去離子水沖洗填料5個(gè)柱體積;

2.柱的平衡與上樣:

2.1用0.02M TB bufferA 緩沖液(PH7.6)平衡Ni柱,直至流出液的pH為7.6;

2.2對(duì)處理的樣品進(jìn)行過濾后,緩慢上樣讓蛋白充分結(jié)合;

3洗雜蛋白:

3.1用0.02M TB bufferA 緩沖液(PH7.6)過柱,清洗沒有結(jié)合到層析柱上的雜蛋白,至流出液與緩沖液的OD值接近為止,流出液取20ul做SDS-PAGE檢測(cè);

3.2用含10mMNaCL的TB bufferA 緩沖液(PH7.6)過柱,共洗約30ml,至流出液與含10mMNaCL的TB bufferA 緩沖液的OD值接近為止,流出液取20ul做SDS-PAGE檢測(cè);

3.3用含20mMNaCL的TB bufferA 緩沖液(PH7.6)過柱,共洗約30ml,至流出液與含20mMNaCL的TB bufferA 緩沖液的OD值接近為止,流出液取20ul做SDS-PAGE檢測(cè);

3.4用含40mMNaCL的TB bufferA 緩沖液(PH7.6)過柱,共洗約30ml,至流出液與含40mMNaCL的TB bufferA 緩沖液的OD值接近為止,流出液取20ul做SDS-PAGE檢測(cè);

3.5用含60mMNaCL的TB bufferA 緩沖液(PH7.6)過柱,共洗約30ml,至流出液與含60mMNaCL的TB bufferA 緩沖液的OD值接近為止,流出液取20ul做SDS-PAGE檢測(cè);

3.6用含80mMNaCL的TB bufferA 緩沖液(PH7.6)過柱,共洗約30ml,至流出液與含80mMNaCL的TB bufferA 緩沖液的OD值接近為止,流出液取20ul做SDS-PAGE檢測(cè);

3.2用含100mMNaCL的TB bufferA 緩沖液(PH7.6)過柱,共洗約30ml,至流出液與含100mMNaCL的TB bufferA 緩沖液的OD值接近為止,流出液取20ul做SDS-PAGE檢測(cè);

(具體的洗脫梯度需根據(jù)實(shí)驗(yàn)自行調(diào)整)

4解離目的蛋白:

4.1用含100mMNaCL的TB bufferA 緩沖液(PH7.6)過柱,共洗約30ml,至流出液與含100mMNaCL的TB bufferA 緩沖液的OD值接近為止,流出液取20ul做SDS-PAGE檢測(cè);

4.2 用含200mMNaCL的TB bufferA 緩沖液(PH7.6)過柱,共洗約30ml,至流出液與含200mMNaCL的TB bufferA 緩沖液的OD值接近為止,流出液取20ul做SDS-PAGE檢測(cè);

4.3 用含500mMNaCL的TB bufferA 緩沖液(PH7.6)過柱,共洗約30ml,至流出液與含500mMNaCL的TB bufferA 緩沖液的OD值接近為止,流出液取20ul做SDS-PAGE檢測(cè);

4.4用含1000mMNaCL的TB bufferA 緩沖液(PH7.6)過柱,共洗約30ml,至流出液與含1000mMNaCL的TB bufferA 緩沖液的OD值接近為止,流出液取20ul做SDS-PAGE檢測(cè);

(具體的洗脫梯度需根據(jù)實(shí)驗(yàn)自行調(diào)整)

5.柱的清洗與保存:

5.1用含1000mMNaCL的TB bufferA緩沖液(PH7.6)以沖洗層析柱,共沖洗30ml;

5.2用濃度為1.5M的NaCl溶液沖洗層析柱,共沖洗30ml;

5.3用過濾去離子水沖洗50ml;

5.4用20%乙醇沖洗30ml后于4℃20%乙醇中保存。

可溶性蛋白是植物生理實(shí)驗(yàn)例如植物抗寒性、植物抗逆性的重要指標(biāo)。離子交換柱層析是分離可溶性蛋白的方法之一,本文提供該實(shí)驗(yàn)的一般操作流程,具體的參數(shù)如洗脫度還需根據(jù)實(shí)際的實(shí)驗(yàn)情況作自行的調(diào)節(jié)。
 

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