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細胞凋亡檢測實驗

時間:2015-11-13閱讀:109
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細胞凋亡檢測可以:(1)用于腫瘤細胞和組織在內(nèi)的不同種類病理標本研究;(2)應(yīng)用于臨床診療,新藥研制、生物制品開發(fā)、腫瘤放*、以及從促凋亡角度探索腫瘤的基因治療;(3)對相關(guān)疾病的早期發(fā)現(xiàn)、放*的療效評價具有舉足輕重的地位。


本實驗用1μg/ml 三尖杉酯堿HT在體外誘導(dǎo)培養(yǎng)的HL-60細胞發(fā)生凋亡,同時也有少數(shù)細胞發(fā)生壞死。用Hoechst33342和碘化丙啶(propidium iodide,PI)對細胞進行雙重染色,可以區(qū)別凋亡、壞死及正常細胞。


三尖杉酯堿(HT)是我國自行研制的一種對急性粒細胞白血病,急性單核白血病等有良好療效的抗腫瘤藥物。研究表明HT在0.02~5μg/ml范圍內(nèi)作用2小時,即可誘導(dǎo)HL-60細胞凋亡,并表現(xiàn)出典型的凋亡特征。


細胞膜是一選擇性的生物膜,一般的生物染料如PI等不能穿過質(zhì)膜。當(dāng)細胞壞死時,質(zhì)膜不完整,PI就進入細胞內(nèi)部,它可嵌入到DNA或RNA中,使壞死細胞著色,凋亡細胞和活細胞不著色。而一些活細胞染料由于為親脂性物質(zhì),可跨膜進入活細胞,因而可進行活細胞染色。Hoechst33342是一種活性熒光染料且毒性較弱,它是雙苯并咪唑的一種衍生物。與DNA特異結(jié)合(主要結(jié)合于A-T)堿基區(qū)),顯示凋亡細胞和活細胞。凡是看到有凋亡小體的細胞都是凋亡細胞。

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