一、用異硫氰酸胍提取
1.取200ul樣品數(shù)+陰性對(duì)照+陽(yáng)性對(duì)照個(gè)1.5ml滅菌eppendorf管
2.加600ul異硫氰酸胍,然后加入對(duì)照和樣品,再加200ul氯仿,顛倒混勻
3.13000rpm離心15min
4.在第3步離心快結(jié)束時(shí),另取同樣多eppendorf管,加入400ul -20度預(yù)冷的異丙醇
5.取第3步離心的上清（一定不要吸取到中間白色層,第3步離心結(jié)束往外拿的時(shí)候,管子盡量不要傾斜）轉(zhuǎn)移到第4步準(zhǔn)備的管中,顛倒混勻
6.13000rpm離心15min,輕輕倒去上清；在吸水紙上盡量沾干液體
7.加600ul 75％乙醇,顛倒數(shù)次以洗滌殘存異丙醇
8.13000rpm離心15min,輕輕倒去上清；在吸水紙上盡量沾干液體
9.4000rpm離心10sec,將管壁殘存液體甩到底部,用微量槍頭吸干,室溫干燥2－3min（不可過(guò)分干燥,防止下一步RNA不溶解）
10.加入20ul DEPC水（加入depc的純水高壓后的水即為DEPC水）,輕輕混勻溶解RNA.2000rpm離心5sec,冰上保存?zhèn)溆茫?小時(shí)內(nèi)使用,以免RNA降解）

二、用Trizol LS提取
應(yīng)用Trizol LS提取病毒RNA所提取物為血清、血液、細(xì)胞培養(yǎng)液、雞胚尿囊液等液體中的病毒.提取時(shí)盡量在人少時(shí)進(jìn)行,防止空氣中RNA酶的污染.所用一切物品也應(yīng)是無(wú)RNA酶的.
1.在1.5ml的eppendorf管中加入病毒原液500ul,再加入TRIzol LS 500ul,充分混勻,室溫放置10min.
2.加入200ul的氯仿,蓋緊離心管蓋,用力震蕩離心管（溶液充分乳化,成乳白狀,無(wú)分相現(xiàn)象）,室溫放置10min （由于氯仿沸點(diǎn)低、易揮發(fā),振蕩時(shí)離心管可能爆開(kāi),小心）.
3.離心 4℃、13000r/min、15min,取上層液相移入另一管（切忌吸動(dòng)白色中間相）.
4.加入等體積異丙醇,輕輕顛倒離心管充分混勻液體,室溫放置10min.
5.離心 4℃、13000r/min、15min,（這時(shí)乍一看會(huì)發(fā)現(xiàn)管子里好像沒(méi)有東西,再仔細(xì)看看,會(huì)發(fā)現(xiàn)靠近管底的壁上有一星點(diǎn)的白色沉淀物,就是它了）用槍小心吸去所有上清.
6.1ml75%乙醇洗一遍,離心 4℃、8000r/min、10min,（這時(shí)又會(huì)發(fā)現(xiàn)管子沒(méi)東西了,不要擔(dān)心,有的,但是因?yàn)榱刻倏床灰?jiàn)罷了）用槍小心吸去所有上清,在超凈臺(tái)中干燥5min.
7.加入適量DEPC處理水.（如果材料來(lái)源豐富的話,加入的水量為下一步RT的total減去其他試劑的量；若要省著點(diǎn)用,則自己看著辦了,盡量不要加太多的水）.
8.建議立即做RT.若要保存,可在上一步加入乙醇后凍存于－70℃,可保存一年；若加入DEPC水后則只能在－20℃保存1個(gè)月左右.

三、Trizol法提禽流感病毒
1.取雞胚尿囊液,加入5-10倍體積 Trizol液,混勻；
2.室溫放置5分鐘,然后以每1ml Trizol液加入0.2ml的比例加入氯仿,蓋緊離心管,用手劇烈搖蕩離心管15秒；
3.取上層水相于一新的離心管,按每ml Trizol液加0.5ml異丙醇的比例加入異丙醇,室溫放置10分鐘,12000g離心10分鐘；
4.棄去上清液,按每ml Trizol液加入至少1ml的比例加入75%乙醇,混勻,4℃下7500g離心5分鐘；
5.重復(fù)第4步；
6.小心棄去上清液,然后室溫干燥5-10分鐘,注意不要干燥過(guò)分,否則會(huì)降低RNA的溶解度；
7.然后將RNA溶于水中,放置10分鐘.

[注意]
1.整個(gè)操作要帶口罩及一次性手套,并盡可能在低溫下操作；
2.加氯仿前的勻漿液可在-70℃保存一個(gè)月以上,RNA沉淀在70%乙醇中可在4℃保存一周,-20℃保存一年.