1. 從瓊脂平板挑取形態(tài)相似的純培養(yǎng)菌落接種肉湯培養(yǎng)基，并于35度培養(yǎng)至濁度達(dá)到或超過(guò)0.5麥?zhǔn)蠁挝?，取出用鹽水或肉湯調(diào)節(jié)菌液濃度至0.5麥?zhǔn)蠁挝?，含菌量約（1－2）×108cfu/ml。也可將菌落直接懸浮于無(wú)菌鹽水或肉湯內(nèi)，調(diào)至0.5麥?zhǔn)蠁挝?，這稱為直接菌懸液法。

2. 用無(wú)菌棉拭子浸入調(diào)好的菌懸液中，將多于菌懸液在管壁擠出，在M-H瓊脂平皿上劃線，劃滿整個(gè)瓊脂表面，旋轉(zhuǎn)平皿60°重復(fù)劃線共三次，zui后一次用拭子涂抹瓊脂邊緣。置室溫3－5分鐘。

3.用紙片分配器或無(wú)菌鑷子取藥敏紙片，貼于平板表面，并用鑷尖輕壓一下紙片，使其貼平。每張紙片的間距不小于24mm，紙片的中心距平板的邊緣不小于15mm，90mm直徑的平板適宜貼6張藥敏紙片。

4. 將貼好紙片的平板置35度孵育18－24h后，用游標(biāo)卡尺量取抑菌圈直徑。

根據(jù)抑菌圈的大?。ú煌股仄湟志Υ笮〉臉?biāo)準(zhǔn)不一致），判斷為敏感（S），耐藥（R）或中介度（I）。

某些細(xì)菌可蔓延生長(zhǎng)至某種抗生素的抑菌圈內(nèi)，如磺胺藥抑菌圈內(nèi)可能有微量的細(xì)菌生長(zhǎng)，可忽略不計(jì)，應(yīng)以外圈為準(zhǔn)。