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碘化丙啶染色

時間:2014-7-3閱讀:369
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 1.原理  碘化丙啶(propidium iodide,PI)不能穿人完整的活細胞膜中,即正常細胞和凋亡細胞在不固定的情況下對PI拒染,而壞死細胞 由于失去膜的完整性,PI可進入細胞內與DNA結合,根據此特點,使用PI染色可鑒別死細胞。如果對活細胞染色必須在染色前進行固定,以增加細胞膜對染料的通透性。

 

    2.溶液配制  使用0.01mol/LPBS(pH 7.4)配制終濃度為0.5mg/ml的PI工作液。

 

    3.染色程序

    (1)單層細胞培養(yǎng)標本經預冷70%乙醇固定1小時,4℃;

    (2)0.01mol/LPBS(pH 7.4)沖洗;

    (3)瀝干后加入PI工作液,室溫孵育15分鐘;

    (4)沖洗后封片。

 

    結果:PIzui大激發(fā)波長和zui大發(fā)射波長分別為488nm和630nm,熒光顯微鏡觀察,DNA呈紅色熒光。

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