1.原理 碘化丙啶(propidium iodide,PI)不能穿人完整的活細胞膜中,即正常細胞和凋亡細胞在不固定的情況下對PI拒染,而壞死細胞 由于失去膜的完整性,PI可進入細胞內與DNA結合,根據此特點,使用PI染色可鑒別死細胞。如果對活細胞染色必須在染色前進行固定,以增加細胞膜對染料的通透性。
2.溶液配制 使用0.01mol/LPBS(pH 7.4)配制終濃度為0.5mg/ml的PI工作液。
3.染色程序
(1)單層細胞培養(yǎng)標本經預冷70%乙醇固定1小時,4℃;
(2)0.01mol/LPBS(pH 7.4)沖洗;
(3)瀝干后加入PI工作液,室溫孵育15分鐘;
(4)沖洗后封片。
結果:PIzui大激發(fā)波長和zui大發(fā)射波長分別為488nm和630nm,熒光顯微鏡觀察,DNA呈紅色熒光。
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