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血糖的測定(O-TB法和葡萄糖氧化酶法)

時間:2014-1-10閱讀:1769
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一、改良的鄰甲苯胺硼酸法 (O-TB )

1.了解血糖微量測定的基本原量。

2.掌握血糖正常水平及其測定的臨床意義。

3.復(fù)習(xí)血糖的來源、去路及其調(diào)節(jié)的有關(guān)理論知識。

葡萄糖為一含醛基的己糖,在酸性條件下加熱,可脫水生成5-羥甲基-2-呋喃甲醛,后者與鄰甲苯胺縮合成一綠青色的化合物,其顏色的深淺與樣品中葡萄糖的含量正成比,與進行同樣處理的標準葡萄糖液相比較可求出樣品中葡萄糖的含量。

正常血糖水平為80~120毫克/100ml,在糖尿病及腎上腺皮質(zhì)機能亢進和腦下垂體機能亢進的患者血中葡萄糖含量可顯著升高,饑餓時,血糖水平可下降。

1.O-TB試劑

2.葡萄糖標準液(1.0毫克/毫升)。

1.硬質(zhì)中試管 三支。

2.刻度吸管 :0.1毫升三支;5毫升一支。

取硬質(zhì)中試管 三支,分別標以1、2、3號,按下表操作:混勻后同時將三支試管置于100℃水浴 中,如熱5~6分鐘后,取出用冷水冷卻,在30分鐘內(nèi)用722型分光光度計 在620nm比色。以空白管調(diào)零,分別測得A 和A 。

試劑(毫升)管 號
1(空白管)2(樣品管)3(標準管)
蒸 餾 水0.1  
血 漿 0.1 
葡萄糖標準液  0.1
O-TB試劑5.05.05.0

每100毫升血漿中葡萄糖含量(毫克)

= ×0.1×1000= ×100

附注:如血中葡萄糖糖量過高,顏色太深,可于樣品管中加倍加入O-TB試劑,加熱冷卻后比色,并將zui后的計算結(jié)果乘2,即得每100毫升血漿中葡萄糖的含量。

試劑配制

1.O-TB試劑

冰醋酸 883.2 毫升

硫脲 1.5克

鄰甲苯胺 76.8 毫升

硫脲在冰醋酸中溶解后加鄰甲苯胺混合,再加飽和硼酸溶液40毫升。

充分混勻后放入褐色內(nèi)貯存?zhèn)溆?,一般可貯存幾個月。

附:飽和硼酸溶液:稱取硼酸6克溶于100毫升蒸餾 水中,放置一夜過濾即可應(yīng)用。

2.葡萄糖標準貯存液:每毫升10.0毫克,用0.25%安息香酸溶液配制。

3.葡萄糖標準應(yīng)用液:每毫升1.0毫克,用0.25%安息香酸溶液將貯存液稀釋十倍(3%三氯醋酸可代替安息香酸溶液)。

二、葡萄糖氧化酶 法

在pH7.0條件下,葡萄糖氧化酶 可催化血樣中葡萄糖氧化生成葡萄糖酸及過氧化氫。后者在過氧化物酶的作用下與*,4—氨基安替毗啉氧化縮合成紅色醌式物質(zhì),在505nm處有zui大吸收峰,標本中葡萄糖含量與吸光度成正比,可求得血樣中葡萄糖含量。用本法測定葡萄糖具有高度特異性,因此其準確度遠比O-TB法為高,更能反映了血中葡萄糖的真實含量,是為科研工作中常用的葡萄糖測定方法。隨著試劑藥盒的推廣普及,此法也已廣泛應(yīng)用于臨床檢測。其反應(yīng)過程如下:

葡萄糖氧化酶

β—D葡萄糖+O2 +H2 O D —葡萄糖酸+H2 O2

過氧化物酶

H2 O2 +4—氨基安替吡啉+* H2 O+ 紅色醌式物質(zhì)

取硬質(zhì)中試管三支,分別標以1.2.3號,按下表操作:

 測定管標準管空白管
血清 (或血漿)0.02mL//
葡萄糖標準液100mg/dL/0.02mL/
酶、酚混合試劑1.5mL1.5mL1.5mL

混勻后37℃保溫15分鐘,使用722型分光光度計 在505nm波長下比色,以空白管調(diào)零,分別測得A 和A 。

葡萄糖含量mg/dl= ×100

100為標準液濃度值mg/dl

葡萄糖(氧化酶法)測定試劑盒

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