試劑

成分

備注

_Tris 緩沖液（1x TBS）

10 mM Tris-HCl, pH 8.0; 150 mM      NaCl

磷酸緩沖液 （1x PBS）

9.1mM 磷酸二鈉鹽, 1.7 mM 磷酸一鈉鹽，150 mM 氯化鈉

用NaOH.調(diào) pH to 7.4

電泳上樣緩沖液 （2x）

1.0 ml 甘油, 0.5 ml ?-巰基乙醇,3.0 ml 10% SDS, 1.25 ml 1.0 MTris-HCl, pH 6.7 和 1–2 mg 溴芬蘭，凍存

也可選擇沒有巰基乙醇的緩沖液，室溫存儲(chǔ)，使用前加巰基乙醇

DAB

溶解 5 mg DAB在100ml 100mM Tris-HCl, pH 7.6,加0.1 ml     0.3% 過氧化氫

每次準(zhǔn)備新鮮的DAB溶液

_RIPA溶液

1x PBS, 1% 濕潤劑Nonidet P-40 或表面活性劑Igepal    CA-630, 0.5% 正釩酸鈉, 0.1% SDS

使用時(shí)加入抑制劑如下：

      1） 10 mg/ml PMSF （sc-3597）  加入劑量10 µl/ml RIPA

      2） Aprotinin （sc-3595） 加入劑量 50 KIU/ml RIPA

      3） 100 mM sodium orthovanadate 加入劑量10 µl/ml RIPA

Subbing solution

0.3% （w/v） 明膠,0.05% 硫酸鉻鉀

封阻液A

1x TBS, 5%

milk, 0.05% Tween-20

一般使用

封阻液 B

1x TBS, 1%

milk, 1% BSA, 0.05% Tween-20

適用于所有的磷酸化特異抗體的檢測

向封阻液中加入 50 mM NaF 抑制磷酸酶活性。