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大鼠血管性血友病因子/瑞斯托霉素輔因子(VWF)ELISA試劑盒

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更新時間:2018-03-29 09:17:49瀏覽次數(shù):221次

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檢測范圍:156.25 -10000 pg/ml

原理類型:雙抗夾心

保存條件:2-8℃

有 效 期:六個月

試劑盒保存:2-8℃

適 合 樣本:血清、血漿、組織、上清、卵母細胞等相關體液

大鼠血管性血友病因子/瑞斯托霉素輔因子(VWF)ELISA試劑盒的實驗原理:

固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)。已知濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內(nèi)進行檢測。先將已知濃度的標準品和*標記的抗體同時溫育。洗滌后,加入親和素標記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌,去除未結(jié)合的酶結(jié)合物,然后加入底物A、B,和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中的濃度呈比例關系。

大鼠血管性血友病因子/瑞斯托霉素輔因子(VWF)ELISA試劑盒間接法的操作步驟:

1、用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃過夜。

2、次日洗滌3次。加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml于上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時,洗滌。同時做空白、陰性及陽性孔對照于反應孔中,加入新鮮稀釋的酶標第二抗體(抗抗體)0.1ml,37℃孵育30-60分鐘,洗滌,zui后一遍用DDW(超純水)洗滌。其余步驟同“雙抗體夾心法"的4、5、6。

3. 加底物液顯色:于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃10~30分鐘。4. 終止反應:于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml。

5. 結(jié)果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結(jié)果:反應孔內(nèi)顏色越深,陽性程度越強,陰性反應為無色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“+"、“-"號表示。也可測O?D值:在ELISA檢測儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對照孔調(diào)零后測各孔O?D值,若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性。

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