非洲豬瘟病毒檢測(cè)試劑盒（PCR熒光探針法）免核酸提取，快速檢測(cè)。*認(rèn)可的免核酸提取專門的一家。
【產(chǎn)品名稱】
通用名稱：非洲豬瘟病毒檢測(cè)試劑盒（PCR熒光探針法）
英文名稱：African Swine Fever virus Detection Kit (Real-Time PCR Method)
【包裝規(guī)格】 & 50T/盒
【預(yù)期用途】
本試劑盒適用于非洲豬瘟病毒檢測(cè)，可用于臨床非洲豬瘟病毒感染的輔助診斷，但不作確診使用。
【檢驗(yàn)原理】
本試劑盒針對(duì)非洲豬瘟病毒的高度保守區(qū)域設(shè)計(jì)特異性引物和探針，在反應(yīng)體系中含非洲豬瘟病毒基因組模板的情況下，PCR反應(yīng)得以進(jìn)行并釋放熒光信號(hào)。利用熒光定量PCR儀對(duì)PCR過(guò)程中相應(yīng)通道信號(hào)進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)和輸出，實(shí)現(xiàn)檢測(cè)結(jié)果的定性分析。
【主要組成成份】
序號(hào) 組成 50T/盒
1 ASFV PCR反應(yīng)液 1100 μL/管
2 ASFV 陽(yáng)性對(duì)照 100 μL/管
3 ASFV 陰性對(duì)照 100 μL/管

4 * 12 mL×2管
5 樣本裂解液 1500uL/管
注：陰性對(duì)照為豬基因組DNA，陽(yáng)性為非洲豬瘟經(jīng)滅活處理的核酸提取物。
【儲(chǔ)存條件及有效期】*保存2~8度。其余避光-20℃+—5度保存，避免反復(fù)凍融，有效期12個(gè)月。
【適用儀器】Bio-Rad系列、卡尤迪生物科技MINI8全系列 、等多通道實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀。
【檢驗(yàn)方法】
1. 試劑準(zhǔn)備（試劑準(zhǔn)備區(qū)）
（1）從冰箱中取出試劑盒, 從試劑盒中取出實(shí)驗(yàn)所需試劑,充分融化混勻5秒，并瞬時(shí)離心5秒，以去除管壁附著液體。
2.樣本準(zhǔn)備（樣本處理區(qū)）
具體操作請(qǐng)本故事。

4. PCR（PCR擴(kuò)增區(qū)）
（1）取樣本處理區(qū)準(zhǔn)備好的PCR反應(yīng)管，放置在實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀樣品槽相應(yīng)位置，并記錄放置順序。
（2）按下表設(shè)置儀器核酸擴(kuò)增相關(guān)參數(shù)進(jìn)行PCR擴(kuò)增。

反應(yīng)體積 25 μL 通道選擇 FAM通道采集非洲豬瘟病毒熒光信號(hào)
PCR
反應(yīng)
條件 步驟 條件 循環(huán)數(shù)
UNG處理 95℃：1分鐘（min） 15
預(yù)變性 55℃：1分鐘（min） 1 cycles
預(yù)擴(kuò)增 95℃：1分鐘（min） 1
PCR擴(kuò)增 95℃：5秒（s） 30 cycles
60℃： 15秒（s）
（此階段結(jié)束時(shí)采集熒光信號(hào)）

注：ABI系列熒光PCR儀在設(shè)置時(shí)不選ROX校正，設(shè)置淬滅基團(tuán)選擇None。
【參考值（參考范圍）】
1.試劑盒有效性判定：
（1）陽(yáng)性對(duì)照：有典型S型擴(kuò)增曲線或Ct值≤23。
（2）陰性對(duì)照：無(wú)S擴(kuò)增曲線。
2.標(biāo)本結(jié)果判定：
（1）陽(yáng)性：標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果Ct值≤23或有明顯指數(shù)增長(zhǎng)期。
（2）可疑：標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果Ct值在23～30范圍內(nèi)。此時(shí)應(yīng)對(duì)標(biāo)本進(jìn)行重復(fù)檢測(cè)，如重復(fù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果Ct值仍在30范圍內(nèi)，有明顯指數(shù)增長(zhǎng)期，則判定為陽(yáng)性，否則為陰性。
（3）陰性：標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果Ct值＞38或無(wú)Ct值。
【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】
通道及檢測(cè)結(jié)果 標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果解釋
FAM
陽(yáng)性（＋） 標(biāo)本中檢出非洲豬瘟病毒DNA
陰性（－） 標(biāo)本中未檢出非洲豬瘟病毒DNA
【檢驗(yàn)方法的局限性】
1. 當(dāng)檢測(cè)樣本中被檢核酸濃度低于本試劑盒的*低檢出*可能會(huì)發(fā)生假陰性的結(jié)果。
2. 被檢樣本在采集、運(yùn)輸、儲(chǔ)存以及處理過(guò)程中操作方式不當(dāng)容易造成DNA降解而產(chǎn)生假陰性結(jié)果。
3. 樣本在采集、運(yùn)輸、儲(chǔ)存以及處理過(guò)程中發(fā)生交叉污染，則容易得到假陽(yáng)性結(jié)果。

【注意事項(xiàng)】
1. 整個(gè)檢測(cè)過(guò)程應(yīng)嚴(yán)格按照本說(shuō)明書要求分別在試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴(kuò)增區(qū)進(jìn)行操作，各區(qū)實(shí)驗(yàn)服、儀器、耗材應(yīng)獨(dú)立使用，不能混用；實(shí)驗(yàn)用吸頭采用帶濾芯吸頭；樣本處理區(qū)應(yīng)配有生物安全柜，樣本處理在生物安全柜中進(jìn)行操作；三個(gè)區(qū)應(yīng)該配有紫外線**裝置。
2. 為避免DNA降解，樣本處理過(guò)程應(yīng)在0-4℃條件下操作，且完成實(shí)驗(yàn)后立即上機(jī)檢測(cè)；樣本處理過(guò)程中使用的器具耗材應(yīng)經(jīng)過(guò)無(wú)核酶處理。
3. 每次實(shí)驗(yàn)應(yīng)該設(shè)置陰、陽(yáng)性對(duì)照。
4. 試劑盒所有試劑在使用前應(yīng)該在常溫下充分融化混勻，并應(yīng)瞬時(shí)離心。
5. 試劑盒內(nèi)所配陰性和陽(yáng)性對(duì)照在**次使用前應(yīng)全部轉(zhuǎn)移至標(biāo)本準(zhǔn)備區(qū)，并單獨(dú)存放。
6. 為防止熒光干擾，應(yīng)避免裸手直接接觸PCR反應(yīng)管，并應(yīng)避免在PCR反應(yīng)管上進(jìn)行任何標(biāo)記。
7. 儀器擴(kuò)增相關(guān)參數(shù)應(yīng)按照本說(shuō)明書相關(guān)要求進(jìn)行設(shè)置；不同批號(hào)試劑不能混用。
8. ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設(shè)置中不選ROX校正，淬滅基因選擇None。
9. 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中產(chǎn)品的廢棄物應(yīng)該進(jìn)行無(wú)害化處理后方可丟棄。