分析方案

以下方案是使用Helixyte Green 定量dsDNA的實例。 在打開樣品瓶之前，讓Helixyte Green 溫?zé)嶂潦覝亍?/span>

注意：沒有數(shù)據(jù)可用于解決Helixyte Green dsDNA染色的致突變性或毒性。 因為這種試劑與核酸結(jié)合，所以應(yīng)將其作為潛在的誘變劑進(jìn)行處理，并進(jìn)行適當(dāng)?shù)奶幚怼?應(yīng)特別小心處理DMSO儲備溶液，因為已知DMSO有助于有機(jī)分子進(jìn)入組織。

1.準(zhǔn)備Helixyte Green 工作解決方案：

1.1通過在TE（10mM Tris-HCl，1mM EDTA，pH 7.5-8.0）中濃縮DMSO溶液200倍稀釋，制備Helixyte Green的水性工作溶液。 例如，將50μLHelixyteGreen添加至10 mL TE，以制備足夠的工作溶液，以在200μL終體積中測定100個樣品。通過用鋁箔覆蓋或?qū)⑵渲糜诤诎抵衼肀Ｗo(hù)工作溶液免受光照。

注1：我們建議將此溶液用塑料容器而不是玻璃制備，因為染料可能會吸附到玻璃表面。

注2：為獲得佳結(jié)果，該溶液應(yīng)在制備后幾小時內(nèi)使用。

2.準(zhǔn)備dsDNA標(biāo)準(zhǔn)品的連續(xù)稀釋液（0至3 ng / mL）：

2.1在ddH2O中制備1mg / mL的dsDNA原液（如來自Sigma的小牛胸腺DNA）。

2.2將10μL1mg / mL dsDNA原液（步驟2.1）加入到998 L TE緩沖液中，得到10μg/ mL dsDNA溶液，然后進(jìn)行1:10和1：2連續(xù)稀釋，得到1000,100,50,25 ，12.5,6.25,3.125和0 ng / mL。

2.3如說明書中的表1和2中所述，將dsDNA標(biāo)準(zhǔn)品和含有測試樣品的DNA添加到96孔固體黑色微孔板中。

3.運(yùn)行dsDNA測定：

3.1將100μLdsDNA測定混合物（來自步驟1.1）添加至dsDNA標(biāo)準(zhǔn)品的每個孔，空白對照和測試樣品（參見步驟2.3）以使總dsDNA測定體積為200μL/孔。

注1：對于384孔板，每孔加入25μL樣品和25μLdsDNA測定混合物。

注2：對于基于曲線的測定，每曲線添加1mL樣品和1mL dsDNA測定混合物。

3.2在室溫下孵育反應(yīng)5至10分鐘，避光。

3.3使用熒光酶標(biāo)儀在Ex / Em = 490 / 525nm（在515nm處截止）觀察熒光增加。

3.4空白孔中的熒光（僅含TE緩沖液）用作對照，并從具有dsDNA反應(yīng)的那些孔的值中減去。 從DNA標(biāo)準(zhǔn)曲線中產(chǎn)生的標(biāo)準(zhǔn)曲線確定樣品的DNA濃度。