傅經(jīng)理
高爾基染色
一.實(shí)驗(yàn)步驟
1、取材固定:將老鼠殺死后,立刻取腦組織置于4%的多聚甲醛液中固定24h以上。
2、高爾基染色:用生理鹽水將腦組織輕輕漂洗幾遍,將需要的實(shí)驗(yàn)部位切成2-3mm厚的腦組織塊,高爾基染液將腦組織塊*浸沒(méi),放置陰涼通風(fēng)處避光處理14天,浸泡48h后,換一次新染液,之后每隔3天換一次新染液。
3、組織塊脫水:將組織塊取出,置于15%的蔗糖溶液中4℃且避光條件下脫水約1天,取出組織塊,置于30%的蔗糖溶液中4℃且避光條件下脫水2天。
4、顯影:將組織塊取出,蒸餾水洗1min,濃氨水處理45min,蒸餾水洗1min,定影液處理45min,蒸餾水洗1min。
5、脫水冰切封片:置于30%的蔗糖溶液中4℃且避光條件下脫水2-3天,冰凍切片100um,甘油明膠封片,拍照保存結(jié)果。
6、顯微鏡鏡檢,圖像采集分析。
二、結(jié)果判讀:
神經(jīng)元呈黑色,膠質(zhì)細(xì)胞呈黑色,背景灰色或者棕黃色。
三、注意事項(xiàng):
1、染液配制的量需要根據(jù)實(shí)際情況來(lái)定,配制過(guò)多易造成浪費(fèi)。
2、染液一定要避光保存,并且實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的每一步操作都要求避光。
3、染色完成后,若客戶(hù)需要返還組織塊,將剩余組織塊放在30%的蔗糖中4℃避光運(yùn)輸。
高爾基染色
其他相關(guān)實(shí)驗(yàn):
包埋 | 組織石蠟包埋 |
植物樣本包埋 | |
細(xì)胞石蠟包埋 | |
組織芯片定位 | |
組織芯片蠟塊制作 | |
瓊脂包埋 | |
樹(shù)脂包埋(透射電鏡) | |
切片 | 石蠟切片 |
組織芯片切片 | |
冰凍切片 | |
半薄切片 | |
超薄切片 | |
標(biāo)本前處理 | 骨組織脫鈣(普通 大鼠 小鼠) |
骨組織脫鈣(其他) | |
植物標(biāo)本軟化(普通根 莖) | |
植物標(biāo)本軟化(種子、硬枝) |