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一滴血做流式，選擇guava微流式技術(shù)
超微量樣本檢測(cè)T淋巴細(xì)胞亞群變化
常規(guī)流式實(shí)驗(yàn)至少需要100μl 樣品（1×106個(gè)細(xì)胞）完成一次檢測(cè)，無(wú)法滿足“一滴血做流式"的需要。
默克密理博的“guava微流式技術(shù)"成功突破此瓶頸，以10μl超微量上樣量（1×105個(gè)細(xì)胞）
完成常見(jiàn)流式細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)。不僅大大節(jié)省了細(xì)胞量、藥物、抗體，也有效地降低了實(shí)驗(yàn)者工作負(fù)擔(dān)。
現(xiàn)在，以常規(guī)樣品量（100μl）至少可以完成10次實(shí)驗(yàn)，從而開(kāi)拓新實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)思路，加速科研成果的誕生！
“使用(Guava)流式細(xì)胞儀使得樣本量減少90%以上，同時(shí)每份樣本的檢測(cè)時(shí)間從120s降低至10s"。
——Bruce K. Patterson 個(gè)展開(kāi)個(gè)體化治療研發(fā)的
Invirion診斷公司與Evanston西北健康公司和斯坦福大學(xué)醫(yī)學(xué)院的一項(xiàng)以宮頸癌檢測(cè)的聯(lián)合研究報(bào)告中提到（見(jiàn)文獻(xiàn)）

“目前為止，很少有研究者對(duì)同一只小鼠進(jìn)行縱向的疾病進(jìn)程跟蹤研究，這是因?yàn)閭鹘y(tǒng)的流式細(xì)胞儀
無(wú)法支持超微樣本量的檢測(cè)。Guava微流式細(xì)胞分析儀使得對(duì)慢性免疫疾病發(fā)展進(jìn)行縱向跟蹤的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)成為現(xiàn)實(shí)" 。
——美國(guó)運(yùn)動(dòng)醫(yī)學(xué)專(zhuān)家，MED SCI SPORT EXER雜志評(píng)委，
休斯頓大學(xué)生理學(xué)教授Dr. McFarlin在Immunology Method發(fā)表論文提到。（見(jiàn)文獻(xiàn)）
以較為常見(jiàn)的T淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)為例
T淋巴細(xì)胞亞群在許多臨床疾病中可發(fā)生異常改變，特別是免疫功能受損的病人。測(cè)定T淋巴細(xì)胞亞群變化
對(duì)了解疾病的發(fā)病機(jī)制、指導(dǎo)臨床治療、控制疾病的發(fā)生發(fā)展均有重要意義。根據(jù)不同的表面標(biāo)志物可以
對(duì)T細(xì)胞進(jìn)行分群，其中CD3+/CD4+為輔助性T細(xì)胞，CD3+/CD8+為殺傷性T細(xì)胞。使用流式細(xì)胞儀和熒
光標(biāo)記抗體，可以對(duì)人全血標(biāo)本中T細(xì)胞CD3/CD4進(jìn)行分群和計(jì)數(shù)。

實(shí)驗(yàn)流程
在96孔板中加入10ul CD8-FITC/CD4-PE/CD3-PECY5 預(yù)混試劑，或者根據(jù)抗體說(shuō)明書(shū)加入相應(yīng)體積抗體；
在每孔中加入10ul抗凝全血（約1×105細(xì)胞）；
用槍頭上下吹打混勻試劑和全血（確保沒(méi)有血樣粘附在孔壁上影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果）；
室溫（18-25℃）避光孵育20min；
每孔中加入180ul 1X Lysing Solution或相應(yīng)體積的裂解試劑；
立即用槍頭上下吹打混勻每孔；
室溫（18-25℃）避光孵育15min；
盡快用流式細(xì)胞儀獲取結(jié)果（3h內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)）

結(jié)果可見(jiàn)：通過(guò)CD3,CD4,CD8的檢測(cè)指標(biāo)對(duì)全血樣本中T淋巴細(xì)胞進(jìn)行正確區(qū)分，并同時(shí)報(bào)告Th細(xì)胞和Tc細(xì)胞的計(jì)數(shù)結(jié)果。
證明10μl的樣本借助“guava微流式"技術(shù)同樣能夠完成流式檢測(cè)，并且所獲得的數(shù)據(jù)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，準(zhǔn)確區(qū)分了T淋巴細(xì)胞各個(gè)亞群。

*引用對(duì)應(yīng)文獻(xiàn)
1 Polina, R., et al., Rapid, high throughput determination of cervical cytology specimen adequacy using a capillary-based cytometer.
Cytometry B Clin Cytom, 2008. 74(2): p. 133-6.
2 Breslin., W.L., et al., Mouse blood monocytes: Standardizing their identification and analysis using CD115
.Journal of Immunological Methods, 2011.