本公司生產(chǎn)的Stable電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞是經(jīng)特殊工藝處理得到的感受態(tài)細(xì)胞，可用于DNA的化學(xué)轉(zhuǎn)化。使用pCAMBIA2301M質(zhì)粒DNA檢測，轉(zhuǎn)化效率達(dá)10¹⁰cfu/μg DNA以上。    

基因型為：F' proA+B+ lacIq ?(lacZ)M15 zzf::Tn10 (Tet^R) ?(ara-leu) 7697 araD139 fhuA?

lacX74 galK16 galE15 e14- Φ80dlacZ?M15 recA1 relA1 endA1 nupG rpsL (Str^R) rph spoT1 ?(mrr-hsdRMS -mcrBC)

產(chǎn)品特點(diǎn):

Stable菌株是NEB公司開發(fā)的高轉(zhuǎn)化效率菌株，是逆轉(zhuǎn)錄病毒/慢病毒載體系統(tǒng)推薦使用的菌株，特別適合慢病毒或具有末端重復(fù)序列DNA片段的克隆?；蚪M含有重組酶recA1 rel A1突變，可有效抑制長片段末端重復(fù)區(qū)的重組，降低錯(cuò)誤重組的概率；同時(shí)含有核酸酶endA1突變，避免了提取質(zhì)粒過程中核酸酶的污染，大大提高了高純度病毒質(zhì)粒的產(chǎn)量和質(zhì)量。lacZΔM15的存在使Stable可用于藍(lán)、白斑篩選，此菌株具有四環(huán)素和lianmeisu抗性。

以下操作均按無菌條件的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行:1.0.1cm電擊杯和杯蓋從儲存液中拿出倒置于干凈的吸水紙上5min待其瀝干水分,正置5min使乙醇充分揮發(fā)，待乙醇揮發(fā)干凈立即插入冰中,壓實(shí)冰面,電極杯頂離冰面0.5cm以方便蓋上杯蓋,冰中靜置5min 充分降溫。2.取-70°C保存的 Turbo電擊感受態(tài)細(xì)胞插入冰中5min,待其融化,加入目的DNA(質(zhì)粒或連接產(chǎn)物)并用手boda離心管底輕輕混勻,避免產(chǎn)生氣泡,立即插入冰中。

A.測定轉(zhuǎn)化效率使用1μl 0.lng/ul 的對照質(zhì)粒pUC19;

B.對于連接產(chǎn)物,請用乙醇沉淀DNA后加入適量TE緩沖液(10mM Tris-HCl,pH7.5;lmM EDTA)重懸,DNA濃度不超過 100ng/μl,體積不超過5μl/50μl感受態(tài)。

3.用200μl 槍頭(用刀切除0.5cm槍尖)將感受態(tài)-DNA混合物快速移到電擊杯中,避免產(chǎn)生氣泡,蓋上杯蓋。

4.啟動電轉(zhuǎn)儀,設(shè)置參數(shù):C=25μF,PC=200Ω,V=1.8kV(BioRad電轉(zhuǎn)儀推薦參數(shù));也可按所用電轉(zhuǎn)儀推薦的參數(shù)操作。將電擊杯快速放入電轉(zhuǎn)槽中,電擊完成快速插入冰中。

5.2min后從冰中取出電擊杯,放室溫,加入700ul不含抗生素的無菌S.O.C.培養(yǎng)基(室溫),用1ml 槍吹吸電擊杯底部數(shù)次混勻后,轉(zhuǎn)移到50ml離心管(BD Falcon 50ml 錐形離心管等),向離心管中補(bǔ)加S.O.C.培養(yǎng)基至10ml。傾斜45度放入搖床,37℃,2