BJ5183-AD-1電轉感受態(tài)細胞是經特殊工藝處理得到的感受態(tài)細胞，可用于DNA的化學轉化。使用pCAMBIA2301M質粒DNA檢測，轉化效率達10cfu/μg DNA以上。

基因型為:endA1 sbcBC recBC galK met thi-1 bioT hsdR(StrR)[pAdEasy-1 (AmpR )]

產品特點:

BJ5183-AD-1電轉感受態(tài)細胞只能用于電擊轉化，不能用于熱激轉化。該菌株攜帶的pAdEasy-1質粒包含了大部分人腺病毒5型的基因組序列(E1/E3基因缺失)，表達可供pAdEasy-1骨架質粒和pAdEasy穿梭質粒進行同源重組的所有組分，產生重組腺病毒質粒。pAdEasy-1為33.5kb，具有氨芐qingmeisu抗性，一旦與穿梭載體重組，其抗性消失。

操作方法:1.電極間距為 0.1cm 的電轉杯(Gene Pulser®/MicroPulser ™electroporation cuvettes)插入碎冰中,壓實冰面,冰中靜置5分鐘,使電轉杯充分降溫。(電轉杯重復使用方法:每次用完后,用大量的自來水沖洗干凈去掉菌液和DNA,用蒸餾水洗3 遍,將其泡在75%乙醇中30分鐘,取出杯子,瀝干液體,放在超凈臺中,使乙醇充分揮發(fā),蓋上蓋子放干燥地方備用)。2.取-70℃保存的感受態(tài)細胞插入冰中,待細胞剛化凍后,加入質粒DNA(洗脫或溶解質粒的溶液

中離子不能太高,或用雙蒸水稀釋),用手指boda管底輕輕混勻,立即插入冰中,在超凈臺中用無菌吸頭將細胞/DNA混合物快速轉移到電擊杯中,避免產生氣泡,確保細胞沉到杯底,蓋上杯蓋,空管保留待用。

3.啟動電轉儀,設置電擊參數(shù):2.4 kV,200Ω,25 μF(BTX ECM 630或Bio-Rad GenePulser)。用紙巾擦掉電轉杯外部的水分,將電轉杯放入電轉槽中進行電擊。完成后,將電轉杯插入冰中,加入950μlt+A)無抗生素的 SOC 或LB培養(yǎng)基,并將液體轉移到原來保留的感受態(tài)空管中,37C,150-250rpm 振蕩培養(yǎng)1小時4.取 100-200μl左右的菌液或稀釋后的菌液,涂布于含相應抗生素的LB平板上,倒置放于37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng) 12-18小時。