XL10-Gold是由Stratagene開(kāi)發(fā)的特異性用于大質(zhì)?；蛘滟F連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化或構(gòu)建文庫(kù)的超級(jí)感受態(tài)細(xì)胞。XL10-Gold菌株為Hte(high transformation efficiency)基因型，Hte是Stratagene開(kāi)發(fā)的特異性提高感受態(tài)轉(zhuǎn)化效率及大質(zhì)粒轉(zhuǎn)化能力的宿主菌基因型，已成功應(yīng)用于40kd質(zhì)粒的構(gòu)建。[Δ(mcrA)183 Δ(mcrCB-hsdSMR-mrr)173]賦予XL10-Gold缺失幾乎所有已知的限制酶切系統(tǒng)；同時(shí)缺失核酸內(nèi)切酶(endA)，提高了質(zhì)粒DNA的產(chǎn)量和質(zhì)量；重組酶缺陷型(recA)減少插入片段的同源重組概率，保證了插入DNA的穩(wěn)定性；TetR，CamR賦予菌株四環(huán)素和lvmeisu抗性；lacIqZΔM15的存在使XL10-Gold可用于藍(lán)、白斑篩選。XL10-Gold電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率可達(dá)1×10¹⁰cfu/μg DNA。                

基因型為：Tet^R Δ(mcrA)183 Δ(mcrCB-hsdSMR-mrr)173 endA1 supE44 thi-1 recA1 gyrA96 relA1 lac Hte [F' proAB lacIqZΔM15 Tn10 (Tet^R) Amy Cam^R]

1.電極間距為0.1cm 的電轉(zhuǎn)杯(Gene Pulser*/MicroPulser™ electroporation cuvettes)插入碎冰中，壓實(shí)冰面,冰中靜置5分鐘,使電轉(zhuǎn)杯充分降溫。(電轉(zhuǎn)杯重復(fù)使用方法:每次用完后,用大量的自來(lái)水沖洗干凈去掉菌液和 DNA,用蒸餾水洗3遍,將其泡在75%乙醇中30分鐘,取出杯子,瀝干液體,放在超凈臺(tái)中,使乙醇充分揮發(fā),蓋上蓋子放干燥地方備用)。2.取-70℃保存的感受態(tài)細(xì)胞插入冰中,待細(xì)胞剛化凍后,加入質(zhì)粒DNA或連接產(chǎn)物(洗脫或溶解質(zhì)粒的溶液中離子不能太高,或用雙蒸水稀釋,對(duì)照pUC19可以用無(wú)菌水稀釋到10pg/μl),用手指boda管底輕輕混勻,立即插入冰中,在超凈臺(tái)中用無(wú)菌吸頭將細(xì)胞/DNA混合物快速轉(zhuǎn)移到電擊杯中,避免產(chǎn)

生氣泡,確保細(xì)胞沉到杯底,蓋上杯蓋,空管保留待用。3.啟動(dòng)電轉(zhuǎn)儀,設(shè)置電擊參數(shù):2.4kV,200Ω,25μF(BTX ECM 630或Bio-Rad GenePulser)。用紙巾

擦掉電轉(zhuǎn)杯外部的水分,將電轉(zhuǎn)杯放入電轉(zhuǎn)槽中進(jìn)行電擊。完成后,將電轉(zhuǎn)杯插入冰中,加入950μl無(wú)抗生素的 SOC 或 LB培養(yǎng)基,并將液體轉(zhuǎn)移到原來(lái)保留的感受態(tài)空管中,37℃,150-250rpm 振蕩培養(yǎng)1小時(shí)。