XL1-Blue 電擊感受態(tài)細胞只能用于電擊轉化,不能用于熱激轉化。XL1-Blue菌株能保證高拷貝質粒穩(wěn)定復制,recA1和endA1的突變有利于插入DNA的穩(wěn)定和高純度質粒DNA 的提取。hsdR17突變導致EcoK核酸內(nèi)切酶系統(tǒng)缺失,增強了外源DNA的穩(wěn)定性和提取質量。lacIqZAM15的存在使XL1-Blue菌株可用于藍、白斑篩選。此菌株具有四環(huán)素抗性。XL1-Blue電擊感受態(tài)細胞適用于各種文庫構建,經(jīng)特殊工藝制作,pUC19質粒檢測轉化效率可達1x10"cfu/μg DNA。
基因型為:recAl endA1 gyrA96thi-1 hsdR17 supE44 (r,mk), relA1 lac [F' proABlacIZ A M15: Tn10 (Tet)]
操作方法:
1.0.1cm 電擊杯和杯蓋從儲存液中拿出倒置于干凈的吸水紙上5分鐘,待其瀝干水分,正置5分鐘,使乙醇充分揮發(fā),待乙醇揮發(fā)干凈立即插入冰中,壓實冰面,電極杯頂離冰面0.5cm以方便蓋上杯蓋,冰中靜置5分鐘充分降溫。
2.取-80℃保存的XL1-Blue電擊感受態(tài)細胞插入冰中5分鐘,待其融化,加入目的DNA(質粒或連接
產(chǎn)物)并用手bodaEP管底輕輕混勻,避免產(chǎn)生氣泡,立即插入冰中。
A.測定轉化效率使用1μl 10pg/μl 的對照質粒pUC19;
B.對于連接產(chǎn)物,請用乙醇沉淀DNA后