正式測定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定                                          

測定意義：

CK(EC 2.7.3.2)主要存在于心臟、肌肉以及腦等組織中，能可逆地催化肌酸與ATP之間的轉(zhuǎn)磷酰基反應(yīng)，在能量運(yùn)轉(zhuǎn)、肌肉收縮和ATP再生中有重要作用，是臨床診斷心腦疾病的一個(gè)重要指標(biāo)。

測定原理：

CK催化磷酸肌酸和ADP生成肌酸和ATP，己糖激酶催化ATP與葡萄糖形成6-磷酸葡萄糖，6-磷酸葡萄糖脫氫酶催化6-磷酸葡萄糖與NADP+生成NADPH，導(dǎo)致340nm光吸收值增加。

組成：

試劑一：粉劑1瓶，4℃避光保存，使用前加15ml蒸餾水溶解。

工作液：臨用前根據(jù)用量將試劑一和試劑二以1:1混合。使用前37℃溫育2min。

自備儀器和用品：

天平、低溫離心機(jī)、恒溫水浴鍋、紫外分光光度計(jì)、1 ml石英比色皿和蒸餾水。

粗酶液提取：

1. 組織樣本：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml提取液）進(jìn)行冰浴勻漿，然后10000g，4℃離心15min，取上清，置冰上待測。

2. 血清樣本：直接測定。

測定步驟：

1. 紫外分光光度計(jì)預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長至340nm，蒸餾水調(diào)零。

2．在1 ml石英比色皿中加入200μl樣本和300μl蒸餾水，最后加入500μl工作液，立即混勻，37℃下測定初始吸光值A1與1min后的吸光值A2，ΔA＝A2-A1。

CK活性計(jì)算公式

1、按組織蛋白含量計(jì)算

酶活定義：37℃，pH7.0時(shí)，每毫克蛋白質(zhì)1min內(nèi)催化產(chǎn)生1nmol NADPH為一個(gè)酶活單位。

CK活性（nmol/min / mg prot）=×V反總÷(V樣×Cpr)= 804×△A÷Cpr

2、按組織樣本質(zhì)量計(jì)算：

酶活定義：37℃，pH7.0時(shí)，每克樣品1min內(nèi)催化產(chǎn)生1nmol NADPH為一個(gè)酶活單位。

CK活性（nmol/min /g 鮮重）=×V反總÷(V樣÷V樣總×W)= 804×△A÷W

3. 按血清計(jì)算：

酶活定義：37℃，pH7.0時(shí)，每升血清1min內(nèi)催化產(chǎn)生1nmol NADPH為一個(gè)酶活單位。

CK活性（nmol/min /L）=×V反總÷V樣= 804×△A

：NADPH摩爾消光系數(shù)，6220 L /mol/cm；d：比色皿光徑，1cm；V反總：反應(yīng)體系總體積，1ml；V樣：反應(yīng)體系中樣本體積，0.2ml；T，反應(yīng)時(shí)間，1min；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g

注意事項(xiàng)

1. 配制好的工作液4℃穩(wěn)定7天，請配制后盡快使用。

2. 血清的CK不穩(wěn)定，采集樣本后盡快測定，4℃避光保存可穩(wěn)定24h。

3. 樣品蛋白質(zhì)含量需要另外測定，可選用BCA蛋白含量測定試劑盒進(jìn)行測定。

4. OD值大于0.5可用提取液適當(dāng)稀釋樣品，并在計(jì)算公式中相應(yīng)的改變稀釋倍數(shù)。