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貨號(hào) | 名稱 | 規(guī)格 |
SH0065 | 二氫黃酮醇還原酶（DFR）檢測(cè)試劑盒(分光光度法50T/24S) | 50管/24樣 |
正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義：
二氫黃酮醇還原酶是類(lèi)黃酮合成途徑中的一個(gè)關(guān)鍵酶，在決定植物的花色、葉色、果色和其他經(jīng)濟(jì)器官的色澤及其營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)方面起著重要作用。
測(cè)定原理：
二氫黃酮醇還原酶作用于二氫槲皮素產(chǎn)生兒茶素，可與xiangcaoquan縮合形成紅色化合物，在500nm處有特征吸收峰。
組成：
產(chǎn)品名稱 | SH0065-50T/24S | Storage |
提取液：液體 | 50ml | 4℃ |
試劑一：液體 | 30ml | 4℃ |
試劑二：液體 | 3ml | 4℃ |
試劑三：粉劑 | 1瓶 | 4℃ |
試劑四：液體 | 40ml×2 | 4℃避光 |
說(shuō)明書(shū) | 一份 | |
試劑三：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前加5ml蒸餾水溶解；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
自備儀器和用品：
研缽、低溫離心機(jī)、震蕩儀、氮吹儀、可見(jiàn)分光光度計(jì)、1ml玻璃比色皿、水浴鍋、無(wú)水乙醇、乙酸乙酯。
酶液提取：
1. 組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。10000g ，4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。
2. 液體：直接檢測(cè)。
測(cè)定操作表
對(duì)照管 | 測(cè)定管 | |||
酶液（μl） | 200 | 200 | ||
試劑一（μl） | 700 | 600 | ||
試劑二（μl） | 100 | |||
試劑三（μl） | 100 | 100 | ||
混勻，30℃反應(yīng)30min | ||||
乙酸乙酯（μl） | 1000 | 1000 | ||
37℃震蕩10min，取上層溶液，N2吹干 | ||||
無(wú)水乙醇（μl） | 500 | 500 | ||
充分震蕩 | ||||
試劑四(μl) | 1500 | 1500 | ||
混勻，25℃靜置10min，于1ml玻璃比色皿測(cè)定500nm處吸光值A。分別記為A對(duì)照管和A測(cè)定管，△A=A測(cè)定管-A對(duì)照管 | ||||
酶活性計(jì)算公式：
標(biāo)準(zhǔn)曲線：y=0.0184x+0.0002，R2=0.999
（1）按照蛋白濃度計(jì)算
酶活性定義：在30℃，pH7.5條件下，每毫克蛋白每分鐘分解二氫槲皮素產(chǎn)生1mmol兒茶素所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。
DFR活性（mmol/min/mg prot）=（△A-0.0002）÷0.0184×V反總÷（V樣×Cpr）÷T÷2
= 9.06×（△A-0.0002）÷Cpr
（2）按照樣本質(zhì)量計(jì)算
酶活性定義：在30℃，pH7.5條件下，每克組織每分鐘分解二氫槲皮素產(chǎn)生1mmol兒茶素所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。
DFR活性（mmol/min/g 鮮重）= （△A-0.0002）÷0.0184×V反總÷（V樣×W÷V樣總）÷T÷2
= 9.06×（△A-0.0002）÷W
（3）按液體體積計(jì)算
酶活性定義：在30℃，pH7.5條件下，每毫升液體每分鐘分解二氫槲皮素產(chǎn)生1mmol兒茶素所需的酶量為一個(gè)酶活力單位。
DFR活性（mmol/min/ml）=（△A-0.0002）÷0.0184×V反總÷V樣÷T÷2
= 9.06×（△A-0.0002）
V反總：反應(yīng)總體積，1ml；V樣：反應(yīng)體系中樣本體積，0.1ml；V樣總：加入提取液體積，1ml；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/ml；W，樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時(shí)間，30min
