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貨號(hào) | 名稱(chēng) | 規(guī)格 |
SH0057 | 總巰基測(cè)定試劑盒(分光光度法50T/24S) | 50管/24樣 |
正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義：
生物體內(nèi)巰基主要包括guguanggantai巰基和蛋白質(zhì)巰基。前者不僅能夠修復(fù)氧化損傷的蛋白質(zhì)，而且參與活性氧清除，后者對(duì)于維持蛋白質(zhì)構(gòu)象具有重要作用。通過(guò)測(cè)定總巰基含量和GSH含量，能夠間接測(cè)定蛋白質(zhì)巰基含量。
測(cè)定原理：
巰基基團(tuán)與5,5’- 二硫代-雙-硝基苯甲酸（DTNB）反應(yīng)，生成黃色化合物，在412nm處有最大吸收峰。
組成：
產(chǎn)品名稱(chēng) | SH0057-50T/24S | Storage |
試劑一：液體 | 40ml | 4℃ |
試劑二：液體 | 2ml | 4℃避光 |
說(shuō)明書(shū) | 一份 | |
自備儀器和用品：
天平、研缽、可見(jiàn)分光光度計(jì)、恒溫水浴鍋、1ml玻璃比色皿、乙醇和蒸餾水。
樣品的制備：
1. 按照組織質(zhì)量（g）：水體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱(chēng)取約0.1g組織，加入1ml提取液）進(jìn)行冰浴勻漿，然后8000g，4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。
2. 血清，培養(yǎng)液：稀釋5倍后測(cè)定，可取0.1ml樣本，加入0.4ml蒸餾水，混勻，置冰上待測(cè)。
測(cè)定操作表：
1、分光光度計(jì)預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至412nm，雙蒸水調(diào)零。
2、操作表
在1ml玻璃比色皿中加入如下試劑
對(duì)照管 | 測(cè)定管 | |
樣品（μl） | 200 | 200 |
試劑一（μl） | 750 | 750 |
試劑二（μl） | 50 | |
乙醇（μl） | 50 | |
混勻，25℃靜置10min， 測(cè)定412nm吸光值，ΔA=A測(cè)定-A對(duì)照。每個(gè)測(cè)定管設(shè)一個(gè)對(duì)照管。 | ||
計(jì)算公式：
總巰基標(biāo)準(zhǔn)曲線：y =3.6222 x- 0.0037，R2 = 1，x為標(biāo)品濃度，單位μmol/ml， y為吸光度ΔA。
1. 組織：
（1）按樣本重量計(jì)算
總巰基含量（μmol/g 鮮重）=（ΔA+0.0037）÷3.6222 ×V樣總÷W
=0.276×（ΔA+0.0037）÷W
（2）按樣本蛋白濃度計(jì)算
總巰基含量（μmol/mg prot）=（ΔA+0.0037）÷3.6222×V樣總÷Cpr
=0.276×（ΔA+0.0037）÷Cpr
2. 血清、培養(yǎng)液：
總巰基含量（μmol/L）=（ΔA+0.0037）÷3.6222 ×5×103
=1380×（ΔA+0.0037）
V樣總：加入提取液體積，1ml；W：樣品質(zhì)量，g ；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/ml；5：血清，培養(yǎng)液等液體樣本稀釋倍數(shù)；103 ：1mmol/L=103μmol/ L
注意事項(xiàng)：
zuidi檢出限為10μmol/L。
