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貨號(hào) | 名稱 | 規(guī)格 | 存儲(chǔ) |
JY0316-S | PfAgo Endonuclease | 200μL (200 U/μL) | -20℃ |
JY0316-L | PfAgo Endonuclease | 400μL (200 U/μL) | -20℃ |
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
PfAgo核酸內(nèi)切酶（PfAgo Endonuclease）來(lái)源于重組大腸桿菌，含有從激烈火球菌（Pyrococcus furiosus）中克隆的Argonaute（Ago）核酸酶基因，是一種依托引導(dǎo)序列（guide DNA）與靶核酸堿基互補(bǔ)配對(duì)，繼而特異識(shí)別并剪切靶核酸的核酸內(nèi)切酶。PfAgo 核酸內(nèi)切酶在5′磷酸化的guide DNA（大于15 nt）引導(dǎo)下精準(zhǔn)剪切單鏈DNA底物，剪切位點(diǎn)位于與引導(dǎo)序列互補(bǔ)的5′端開(kāi)始的第10和第11個(gè)核苷酸之間，剪切不受靶標(biāo)序列和剪切位點(diǎn)相鄰序列限制。本產(chǎn)品于95℃ 1 小時(shí)，酶活性不損失。
JY0316包裝量為JY0316-S和JY0316-L，各組分于-20℃及以下運(yùn)輸及保存，有效期為24 個(gè)月。長(zhǎng)期保存建議放-80℃。
名稱 | JY0316-S | JY0316-L |
PfAgo Endonuclease | 200μL (200 U/μL) | 400μL (200 U/μL) |
10 × PfAgo Endonuclease Reaction Buffer | 0.5 mL | 1 mL |
1、 自備以下儀器、試劑及耗材，輔助完成后續(xù)PfAgo Endonuclease切割反應(yīng)。
①儀器：PCR 儀器（ABI7500、 QuantStudio 5、Stepone plus）、金屬浴或水浴鍋；
②試劑：40 mM Mn2+( Nuclease-free H2O配制)、Nuclease-free H2O；
③合成引物：guide DNA：5′ P-TTTGGAGCTGGTGGCG 3′；
ss DNA：5′-6-FAM-CCTACGCCACCAGCTCCAACTACCACAA-BHQ1 3′ ；
④耗材：Nuclease-free free EP 管。
2、按下表，配制反應(yīng)體系，并混合均勻。
名稱 | 體積 |
10 μM ssDNA | 2μL |
10 μM guide DNA | 4μL |
40 mM Mn2+ | 1μL |
10 ×PfAgo Endonuclease Reaction Buffer | 2μL |
PfAgo Endonuclease (200 U/μL) | 4μL |
Nuclease-free H2O | up to 20μL |
注：一般使用20 μL 體系，但也可以等比例放大；
試驗(yàn)前用Nuclease-free H2O將ssDNA 、guide DNA 稀釋至相應(yīng)濃度。
2、95℃孵育30 min。
3. 反應(yīng)產(chǎn)物可直接進(jìn)行核酸膠電泳分析。如果不立即電泳，可以加入EDTA 終止反應(yīng)，并先凍存于-20℃。
圖1.對(duì)照DNA的酶切結(jié)果 圖2 酶活檢測(cè)曲線圖
