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Sp-nCas9(H840A) 生化試劑

參   考   價(jià): ¥ 1500

訂  貨  量: ≥1支

具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)

產(chǎn)品型號:32120-01

品       牌:其他品牌

廠商性質(zhì):生產(chǎn)商

所  在  地:南京市

更新時(shí)間:2023-05-24 08:59:11瀏覽次數(shù):211

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CAS 32120-01 產(chǎn)品規(guī)格 100 pmoL
級別 超純、高純
SpCas9來源于S.pyogenes菌株,是依賴于crRNA和tracrRNA(或連接后形成的sgRNA)引導(dǎo)的DNA內(nèi)切核酸酶,在靶標(biāo)雙鏈DNA存在PAM(NGG)的情況下,特異地切割靶標(biāo)雙鏈DNA,使DNA雙鏈斷裂并生成平末端。PAM對于SpCas9的識別和切割都是必需的,其切割位點(diǎn)位于目標(biāo)序列(target sequence)內(nèi),離PAM區(qū)3個堿基。

SpCas9來源于S.pyogenes菌株,是依賴于crRNAtracrRNA(或連接后形成的sgRNA)引導(dǎo)的DNA內(nèi)切核酸酶,在靶標(biāo)雙鏈DNA存在PAM(NGG)的情況下,特異地切割靶標(biāo)雙鏈DNA,使DNA雙鏈斷裂并生成平末端。PAM對于SpCas9的識別和切割都是必需的,其切割位點(diǎn)位于目標(biāo)序列(target sequence)內(nèi),離PAM區(qū)3個堿基。SpCas9酶的HNHRuvC結(jié)構(gòu)域分別負(fù)責(zé)切割靶標(biāo)雙鏈DNA中與sgRNA配對和非配對的鏈。本產(chǎn)品中,SpCas9H840被突變?yōu)?/span>A,從而使其HNH結(jié)構(gòu)域失活。因此,SpCas9 H840A Nickase只有RuvC結(jié)構(gòu)域有剪切活性,僅剪切靶標(biāo)dsDNA中的NTS鏈,形成單鏈切刻。

產(chǎn)品組分

組分

32120-01100 pmoL

32120-031000 pmoL

SpCas9 H840A Nickase(10uMa

100 pmoL

1000 pmoL

10×TOLO Buffer 3

1ml

1ml

a:SpCas9 H840A Nickas10uM,即10pmol/ul, 100pmo規(guī)格l的總體積為10ul,1000pmo規(guī)格l的總體積為100ul.

實(shí)驗(yàn)案例

1.SpCas9 H840A Nickase對超螺旋DNA靶標(biāo)的切刻實(shí)驗(yàn):為了驗(yàn)證SpCas9 H840A Nickase可以剪切特異靶標(biāo)dsDNA中的NTS鏈并產(chǎn)生單鏈切口,我們使用帶有靶位點(diǎn)的超螺旋DNA(cccDNA)作為剪切底物,將SpCas9 H84OA Nickase、sgRNAtarget cccDNA加入剪切反應(yīng)體系,在37℃靜置孵育30 min,然后85℃滅活5 min。切刻后的開環(huán)DNA(ocDNA)較原始的cccDNA遷移速率減慢,因此,可以用1%的瓊脂糖凝膠電泳(150V20 min)檢測樣本條帶。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,SpCas9 H840A Nickase可在sgRNA引導(dǎo)下使target cccDNA產(chǎn)生單鏈切刻。

 

設(shè)計(jì)SpCas9 H840A NickasesgRNA

SpCas9 H840A NickasesgRNA可參照以下序列設(shè)計(jì)(PMID:26545076):

5'-NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNGUUUUAGAGCUAUGCUGAAAGCAUAGCAAGUUAAAAUAAGGCUAGUCCGUUAUCAACUUGAAAAAGUGGCACCGAGUCGGUG-3’,(下劃線表示與特異靶標(biāo)序列互補(bǔ)配對的spacer區(qū))。



重組yidanbaimei(質(zhì)

本產(chǎn)品屬于質(zhì)譜級別的基因工程酶,可特異性切割lai

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