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Mouse CCL3/MIP-1α ELISA Kit 生化試劑

參   考   價: ¥ 2100

訂  貨  量: ≥1支

具體成交價以合同協(xié)議為準(zhǔn)

產(chǎn)品型號:AB-L26102

品       牌:其他品牌

廠商性質(zhì):生產(chǎn)商

所  在  地:南京市

更新時間:2022-12-20 09:48:02瀏覽次數(shù):221

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CAS AB-L26102 產(chǎn)品規(guī)格 48T
級別 超純、高純
本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附檢測技術(shù)。特異性抗Mouse CCL3/MIP-1α 抗體預(yù)包被在高親和力的酶標(biāo)板上。酶標(biāo)板孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品、待測樣本和化的檢測抗體,經(jīng)過孵育,樣本中存在的Mouse CCL3/MIP-1α 與固相抗體和檢測抗體結(jié)合。洗滌去除未結(jié)合的物質(zhì)后,加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的鏈霉親和素(Streptavidin-HRP)。洗滌后,加入顯色底物 TMB,避光顯色。

本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附檢測技術(shù)。特異性抗Mouse CCL3/MIP-1α 抗體預(yù)包被在高親和力的酶標(biāo)板上。酶標(biāo)板孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品、待測樣本和化的檢測抗體,經(jīng)過孵育,樣本中存在的Mouse CCL3/MIP-1α 與固相抗體和檢測抗體結(jié)合。洗滌去除未結(jié)合的物質(zhì)后,加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的鏈霉親和素(Streptavidin-HRP)。洗滌后,加入顯色底物 TMB,避光顯色。顏色反應(yīng)的深淺與樣本中Mouse CCL3/MIP-1α 的濃度成正比。加入終止液終止反應(yīng),在 450 nm 波長(參考波長 570 - 630 nm)測定吸光度值。本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附檢測技術(shù)。特異性抗Mouse CCL3/MIP-1α 抗體預(yù)包被在高親和力的酶標(biāo)板上。酶標(biāo)板孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品、待測樣本和化的檢測抗體,經(jīng)過孵育,樣本中存在的Mouse CCL3/MIP-1α 與固相抗體和檢測抗體結(jié)合。洗滌去除未結(jié)合的物質(zhì)后,加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的鏈霉親和素(Streptavidin-HRP)。洗滌后,加入顯色底物 TMB,避光顯色。顏色反應(yīng)的深淺與樣本中Mouse CCL3/MIP-1α 的濃度成正比。加入終止液終止反應(yīng),在 450 nm 波長(參考波長 570 - 630 nm)測定吸光度值。

本試劑盒采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附檢測技術(shù)。特異性抗Mouse CCL3/MIP-1α 抗體預(yù)包被在高親和力的酶標(biāo)板上。酶標(biāo)板孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品、待測樣本和化的檢測抗體,經(jīng)過孵育,樣本中存在的Mouse CCL3/MIP-1α 與固相抗體和檢測抗體結(jié)合。洗滌去除未結(jié)合的物質(zhì)后,加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的鏈霉親和素(Streptavidin-HRP)。洗滌后,加入顯色底物 TMB,避光顯色。顏色反應(yīng)的深淺與樣本中Mouse CCL3/MIP-1α 的濃度成正比。加入終止液終止反應(yīng),在 450 nm 波長(參考波長 570 - 630 nm)測定吸光度值。

樣本采集與貯存收起

1. 細(xì)胞培養(yǎng)上清

300 × g 離心 10 分鐘去除沉淀物,即刻檢測,或者分裝,-20℃以下貯存。

2. 血清樣本

離心管收集血清。血樣凝集 30 分鐘后,1,000 × g 離心 10 分鐘。吸取血清樣本之后即刻檢測,或者分裝,-20℃以下貯存。

3. 血漿樣本

EDTA、或肝素抗凝收集血漿樣本。1,000 × g 離心 30 分鐘收集樣本。即刻檢測,或者分裝,-20℃以下貯存。本試劑盒可能適用于其它生物學(xué)樣本。細(xì)胞培養(yǎng)上清、血清和血漿已經(jīng)過驗證。

試劑盒提供的材料收起

88.png

自備材料收起

1) 能夠檢測 450 nm 吸光度的酶標(biāo)儀,參考波長 570 nm 或 630 nm

2) 移液器及槍頭、加樣槽

3) 準(zhǔn)備試劑用的試管、離心管、量筒等

4) 蒸餾水或去離子水

5) 渦旋振蕩器、微孔板振蕩器



試劑準(zhǔn)備收起

檢測前請將所有的試劑、樣本恢復(fù)至室溫(18℃-28℃)。如果濃縮的試劑出現(xiàn)結(jié)晶,37℃溫浴,直至結(jié)晶全部溶解。

1×洗液

吸取 20×濃縮洗液 50 ml 至 1 L 的量筒,加蒸餾水至 1,000 ml,輕輕混勻,避免泡沫。轉(zhuǎn)移至干凈瓶內(nèi)。2 - 25℃貯存,1×洗液可穩(wěn)定保存 30 天。

1×檢測緩沖液

吸取 10×濃縮檢測緩沖液 5 ml 至 100 ml 量筒,加蒸餾水至 50 ml,輕輕混勻,避免泡沫。2 - 8℃貯存,1×檢測緩沖液可穩(wěn)定保存 30 天。

試劑盒保存于 2 - 8℃,有效期標(biāo)注于標(biāo)簽上。

技術(shù)要點收起

1) 重溶或者混合蛋白的時候,始終避免氣泡產(chǎn)生。

2) 避免交叉污染,在進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)品加樣、樣本加樣,以及不同試劑加樣的時候,請更換槍頭。不同的試劑,使用不同的加樣槽。

3) 在應(yīng)用自動洗板機(jī)時,加入洗液之后,設(shè)置 30 秒的浸泡程序,或者在不同的洗滌步驟將微孔板掉轉(zhuǎn) 180 度,這樣可以提高分析的準(zhǔn)確度。

4) 為保證結(jié)果的精確性,孵育時封好封板膜。

5) 顯色底物在添加之前應(yīng)是無色的。保持顯色底物始終處于避光態(tài)。

6) 終止液的添加順序應(yīng)與顯色底物的添加順序相同。

添加終止液之后,底物的顏色應(yīng)由藍(lán)色轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色。如果底物呈現(xiàn)綠色,說明終止液與顯色底物沒有充分混勻。

7) 推薦所有的檢測樣本和標(biāo)準(zhǔn)品在檢測中設(shè)復(fù)孔。

8) 在任何情況下,避免接觸微孔板的內(nèi)表面。

操作步驟收起

檢測之前請將所有的試劑、樣本平衡至室溫(18℃-28℃)。

1) 準(zhǔn)備好所有需要的試劑及工作濃度標(biāo)準(zhǔn)品。

2) 將不需要的板條拆卸下來,放回裝有干燥劑的鋁箔袋,重新封好封口。

3) 浸泡酶標(biāo)板:加入300 μl 1×洗液靜置浸泡30 秒。為了獲得理想的實驗結(jié)果浸泡是必須的。棄掉洗液之后,在吸水紙上將微孔板拍干。洗板完成之后,請立即使用微孔板,不要讓微孔板干燥。

4) 加標(biāo)準(zhǔn)品:標(biāo)準(zhǔn)品孔加入 100 μl 2 倍倍比稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品??瞻卓准尤?100 μl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液(血清/血漿樣本)或培養(yǎng)基(細(xì)胞培養(yǎng)上清樣本)。

5) 加樣本:血清/血漿:樣本孔加入 50μl 1×檢測緩沖液和 50μl 樣本。 細(xì)胞培養(yǎng)上清:樣本孔加入 100 μl 細(xì)胞培養(yǎng)上清。

6) 加檢測抗體:每孔加入50 μl 稀釋的檢測抗體(1:100 稀釋)。保證步驟4、5、6 連續(xù)加樣,不要間斷。加樣過程在15 分鐘內(nèi)完成。

7) 孵育:使用封板膜封板。300 轉(zhuǎn)/分鐘振蕩,室溫(18℃-28℃)孵育 2 小時。

8) 洗滌:棄掉液體,每孔加入 300 μl 洗液洗板,洗滌 6 次。每次洗板,在吸水紙上拍干。為獲得理想的實驗性能,必須移除殘留液體。

9) 加酶:每孔加入 100 μl 稀釋的辣根過氧化物酶標(biāo)記的鏈霉親和素(1:100 稀釋)。

10) 孵育:使用新的封板膜封板。300 轉(zhuǎn)/分鐘振蕩,室溫(18℃-28℃)孵育 45 分鐘。

11) 洗滌:重復(fù)步驟 8。

12) 加底物顯色:每孔加入 100 μl 顯色底物 TMB,避光,室溫(18℃-28℃)孵育 5 - 30 分鐘。

13) 加終止液:每孔加入 100 μl 終止液。顏色由藍(lán)色變?yōu)辄S色。如果顏色呈現(xiàn)綠色或者顏色的變化明顯不均勻,請輕輕叩擊板框,充分混勻。

14) 檢測讀數(shù):在 30 分鐘之內(nèi),使用酶標(biāo)儀進(jìn)行雙波長檢測,測定 450 nm 最大吸收波長和 570 nm 或 630 nm 參考波長下的OD 值。校準(zhǔn)后的OD 值為 450 nm 的測定值減去 570 nm 或 630 nm 的測定值。僅使用 450 nm 測定會導(dǎo)致OD 值偏高,并且準(zhǔn)確度降低。

結(jié)果計算收起

90.png

試劑盒性能收起

1) 準(zhǔn)確性:標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值,大于等于0.99;

2) 靈敏度:檢測濃度小于50pg/mL;

3) 特異性:不與其他可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng);

4) 重復(fù)性:板內(nèi)變異系數(shù)小于10%、板間變異系數(shù)小于15%;

5) 貯藏:2-8°C,遊光防潮保存;

6) 有效期:6個月。


高濃度低生長因子基質(zhì)膠

高濃度低生長因子基質(zhì)膠 是一種可溶性的基底膜基質(zhì)膠

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