樣品:

Lane 1(未顯示，標(biāo)記沒(méi)有出現(xiàn)在化學(xué)發(fā)光圖像中):Bio-Rad Precision Plus全藍(lán)色預(yù)染色蛋白梯

Lane 2:擬南芥Ler wt幼苗使用草甘膦處理未知時(shí)間(eIF2alpha磷酸化陽(yáng)性對(duì)照)

Lane 3:擬南芥Ler gcn2 -/-幼苗使用草甘膦處理未知時(shí)間(eIF2alpha磷酸化陰性對(duì)照)

4-9車(chē)道為C24生態(tài)型，4車(chē)道為對(duì)照株，5-9車(chē)道為脅迫株。10-15車(chē)道為Col-0生態(tài)型，10車(chē)道為對(duì)照株，11-15車(chē)道為脅迫株

5-15:擬南芥C24 wt幼苗經(jīng)各種脅迫處理

每個(gè)樣本采集5株擬南芥幼苗(6天生)，并在-80℃保存直至使用。每個(gè)樣品在液氮中研磨，用1倍SDS-PAGE樣品緩沖液提取總蛋白。樣品在70°C變性10分鐘，用10%凝膠SDS-PAGE分離。用半干式轉(zhuǎn)移法在10V下轉(zhuǎn)移至PVDF膜110分鐘。使用Bio-Rad EveryBlot阻斷緩沖液在室溫下阻斷2小時(shí)。將一抗(AgriSera #AS20 4447)與一抗(AgriSera #AS20 4447)在4°C的EveryBlot緩沖液中以1:1000孵育過(guò)夜，然后用1x TBS-T攪拌洗滌3 x 20分鐘。在室溫下，用二抗(AgriSera #AS09 602) 1:10 000在EveryBlot緩沖液中孵育2小時(shí)，然后用1x TBS-T攪拌洗滌3 x 20分鐘。使用AgriSera ECLBright進(jìn)行5分鐘的印跡，然后在Bio-Rad ChemiDoc成像系統(tǒng)上暴露2分鐘。