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本品為鬼筆環(huán)肽-iFluor 514標(biāo)記探針會選擇性地結(jié)合F-肌動蛋白。以納摩爾濃度使用，鬼筆環(huán)肽衍生物是方便的探針，用于標(biāo)記，鑒定和定量甲醛固定和透化組織切片中的F-肌動蛋白，細(xì)胞培養(yǎng)物或無細(xì)胞實(shí)驗(yàn)。肌動蛋白是一種球狀的，大約42kDa的蛋白質(zhì)，幾乎存在于所有真核細(xì)胞中。 它也是最高度保守的蛋白質(zhì)之一，與藻類和人類不同的物種相差不超過20％。 肌動蛋白是細(xì)胞中兩種細(xì)絲的單體亞基：微絲，細(xì)胞骨架的三個主要組分之一，以及微絲，是肌細(xì)胞中收縮裝置的一部分。 因此，肌動蛋白參與許多重要的細(xì)胞過程，包括肌肉收縮，細(xì)胞運(yùn)動，細(xì)胞分裂和胞質(zhì)分裂，囊泡和細(xì)胞器運(yùn)動，細(xì)胞信號傳導(dǎo)，以及細(xì)胞連接和細(xì)胞形狀的建立和維持。
操作步驟
1.制備1X鬼筆環(huán)肽綴合物工作溶液：加入1μL1000X鬼筆環(huán)肽結(jié)合物DMSO溶液至1mL含1％BSA的PBS中。
注意1：鬼筆環(huán)肽綴合物未使用的1000X DMSO儲備溶液應(yīng)等分并儲存在-20℃，避光。
注意2：不同的細(xì)胞類型可能染色不同。鬼筆環(huán)肽綴合物工作溶液的濃度的制備需要根據(jù)實(shí)際而定。
2.染色細(xì)胞：
2.1執(zhí)行甲醛固定，在室溫下將含3.0-4.0％甲醛的細(xì)胞在PBS中孵育10-30分鐘。
注意：避免使用任何含甲醇的固定劑，因?yàn)榧状紩诠潭ㄟ^程中破壞肌動蛋白。 優(yōu)選的固定劑是不含甲醇的甲醛。
2.2用PBS沖洗固定細(xì)胞2-3次。
2.3可選：在PBS中加入0.1％Triton X-100固定細(xì)胞3至5分鐘，以增加滲透性。 用PBS沖洗細(xì)胞2-3次。
2.4將100μL/孔（96孔板）鬼筆環(huán)肽綴合物工作溶液加入固定的細(xì)胞中，并在室溫下染色細(xì)胞20至90分鐘。
2.5在加上蓋玻片之前，用PBS輕輕沖洗細(xì)胞2至3次以除去過量的鬼筆環(huán)肽綴合物，然后在顯微鏡下進(jìn)行，密封和成像。
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