產(chǎn)品信息

產(chǎn)品簡介

鬼筆環(huán)肽（Phalloidin）的結(jié)合阻止絲狀肌動蛋白（微絲）的解離，穩(wěn)定微絲結(jié)構(gòu)，從而破壞微絲的聚合-去聚合的動態(tài)平衡。此特性使得肌動蛋白聚合發(fā)生的臨界濃度（CC）降至＜1µg/mL，因此，可用作一種聚合促進劑。此外，鬼筆環(huán)肽還可抑制F-actin的ATP水解活性。

本品為鬼筆環(huán)肽-iFluor 532標記探針會選擇性地結(jié)合F-肌動蛋白。以納摩爾濃度使用，鬼筆環(huán)肽衍生物是方便的探針，用于標記，鑒定和定量甲醛固定和透化組織切片中的F-肌動蛋白，細胞培養(yǎng)物或無細胞實驗。肌動蛋白是一種球狀的，大約42kDa的蛋白質(zhì)，幾乎存在于所有真核細胞中。 它也是最高度保守的蛋白質(zhì)之一，與藻類和人類不同的物種相差不超過20％。 肌動蛋白是細胞中兩種細絲的單體亞基：微絲，細胞骨架的三個主要組分之一，以及微絲，是肌細胞中收縮裝置的一部分。 因此，肌動蛋白參與許多重要的細胞過程，包括肌肉收縮，細胞運動，細胞分裂和胞質(zhì)分裂，囊泡和細胞器運動，細胞信號傳導，以及細胞連接和細胞形狀的建立和維持，鬼筆環(huán)肽-iFluor 514標記探針是多色成像應用提供的一種熒光鬼筆環(huán)肽衍生物。

Warbio生物以1000×儲存液形式（溶于DMSO）提供，按照100µl/孔（96孔板），總共可做300T。

注意事項：   

鬼筆環(huán)肽  的分子量小，很容易通過細胞，不需要對細胞進行冷丙酮和TRITON X-100處理。毒性較大，戴上手套操作。

有幾種方法都能用來染色組織細胞培養(yǎng)物內(nèi)的肌動蛋白絲（F-actin）染色，其中，固定步驟在獲得可信且具代表性的細胞F-actin分布情況中至關(guān)重要。固定步驟基于實驗自身需求來選擇。多聚甲醛或戊二醛都能得到優(yōu)秀的F-actin染色和良好的板狀偽足維持保存。

操作步驟

1.制備1X鬼筆環(huán)肽綴合物工作溶液：加入1μL1000X鬼筆環(huán)肽結(jié)合物DMSO溶液至1mL含1％BSA的PBS中。

注意1：鬼筆環(huán)肽綴合物未使用的1000X DMSO儲備溶液應等分并儲存在-20℃，避光。

注意2：不同的細胞類型可能染色不同。鬼筆環(huán)肽綴合物工作溶液的濃度的制備需要根據(jù)實際而定。

2.染色細胞：

2.1執(zhí)行甲醛固定，在室溫下將含3.0-4.0％甲醛的細胞在PBS中孵育10-30分鐘。

注意：避免使用任何含甲醇的固定劑，因為甲醇會在固定過程中破壞肌動蛋白。 優(yōu)選的固定劑是不含甲醇的甲醛。

2.2用PBS沖洗固定細胞2-3次。

2.3可選：在PBS中加入0.1％Triton X-100固定細胞3至5分鐘，以增加滲透性。 用PBS沖洗細胞2-3次。

2.4將100μL/孔（96孔板）鬼筆環(huán)肽綴合物工作溶液加入固定的細胞中，并在室溫下染色細胞20至90分鐘。

2.5在加上蓋玻片之前，用PBS輕輕沖洗細胞2至3次以除去過量的鬼筆環(huán)肽綴合物，然后在顯微鏡下進行，密封和成像。

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