我們的Live或Dead™可固定死細胞染色試劑盒是用于標記細胞的一組工具，用于細胞功能的熒光顯微鏡研究。細胞的有效標記提供了一種在空間和時間背景下研究細胞事件的有力方法。這個特定的試劑盒設計用于在藍色熒光中均勻標記固定的哺乳動物細胞，以用于流式細胞儀應用紫激光激發(fā)。該試劑盒使用專有的藍色熒光染料，與細胞成分結合后會發(fā)出更多的熒光。試劑盒中使用的熒光染料已被紫激光（405 nm激發(fā)）充分激發(fā)到460 nm的熒光。該套件為所有基本組件提供了優(yōu)化的細胞標記方案。這是保存特定細胞熒光圖像的工具，

平臺

1. 在HHBS中制備樣品（0.5 mL /測定）
2. 替換為HHBS
3. 將Stain It™Violet 450添加到細胞懸液中
4. 在室溫或37°C下將細胞染色20-60分鐘
5. 洗細胞
6. 修復單元格（可選）
7. 使用適當?shù)募ぐl(fā)/發(fā)射濾光片，用流式細胞儀和/或熒光顯微鏡檢查樣品 

重要筆記
開始實驗前，請在室溫下解凍所有組分。

儲備溶液的制備

除非另有說明，否則所有未使用的儲備溶液應分為一次性使用的等分試樣，并在制備后儲存在-20°C下。避免重復凍融循環(huán)。

1. Stain It™Violet 450儲備溶液（500X）：
將200 µL DMSO（組分B）添加到Stain It™Violet 450（組分A）小瓶中，制成500X Stain It™Violet 450儲備溶液。

程序

表1.  流式細胞儀分析的熒光光譜特性和激發(fā)激光

1. 使用1X Hanks和20 mM Hepes緩沖液（HHBS）或您選擇的無血清/蛋白質的緩沖液制備細胞。
    
2. 用HHBS或您選擇的無血清/蛋白質的緩沖液洗滌細胞一次。
    
3. 以5-10×10 ⁶ / mL的濃度在HHBS或您選擇的無血清/蛋白質的緩沖液中重懸細胞
    
4. 將1 µL 500X Stain It™Violet 450儲備液添加到0.5 mL細胞/測定中，并充分混合。
    
5. 在避光的條件下，于室溫或37°C，5％CO _2的培養(yǎng)箱中孵育20-60分鐘。注意：應通過實驗確定不同細胞系的*染色濃度和孵育時間。
6. 洗滌細胞兩次，然后用HHBS或您選擇的緩沖液重懸細胞。
    
7. 根據(jù)需要固定單元格（可選）。
    
8. 使用適當?shù)募ぐl(fā)/發(fā)射濾光片，使用流式細胞儀和/或熒光顯微鏡分析細胞（參見表1）。

圖片

圖1.通過Live或Dead™固定死細胞染色試劑盒（Cat＃22500）檢測Jurkat細胞活力。處理Jurkat細胞并用Stain It™Violet 450染色，然后固定在3.7％甲醛中，并通過流式細胞儀進行分析。活細胞（紅色），經星形孢菌素處理的細胞（綠色）和經熱處理的細胞（藍色）通過太平洋藍通道進行區(qū)分。

圖2.用甲醛固定并用Live或Dead™可固定死細胞染色試劑盒* 405 nm激發(fā)藍色熒光*的Cola黑墻/透明底部96孔板中染色的Hela細胞圖像。