我們的Live或Dead™可固定死細(xì)胞染色試劑盒是用于標(biāo)記細(xì)胞的一組工具，用于細(xì)胞功能的熒光顯微鏡研究。細(xì)胞的有效標(biāo)記提供了一種在空間和時(shí)間背景下研究細(xì)胞事件的有力方法。這個(gè)特定的試劑盒設(shè)計(jì)用于在藍(lán)色熒光中均勻標(biāo)記固定的哺乳動(dòng)物細(xì)胞，以用于流式細(xì)胞儀應(yīng)用紫激光激發(fā)。該試劑盒使用專有的藍(lán)色熒光染料，與細(xì)胞成分結(jié)合后會(huì)發(fā)出更多的熒光。試劑盒中使用的熒光染料已被紫激光（405 nm激發(fā)）充分激發(fā)到460 nm的熒光。該套件為所有基本組件提供了優(yōu)化的細(xì)胞標(biāo)記方案。這是保存特定細(xì)胞熒光圖像的工具，

平臺(tái)

1. 在HHBS中制備樣品（0.5 mL /測(cè)定）
2. 替換為HHBS
3. 將Stain It™Violet 450添加到細(xì)胞懸液中
4. 在室溫或37°C下將細(xì)胞染色20-60分鐘
5. 洗細(xì)胞
6. 修復(fù)單元格（可選）
7. 使用適當(dāng)?shù)募ぐl(fā)/發(fā)射濾光片，用流式細(xì)胞儀和/或熒光顯微鏡檢查樣品 

重要筆記
開始實(shí)驗(yàn)前，請(qǐng)?jiān)谑覝叵陆鈨鏊薪M分。

儲(chǔ)備溶液的制備

除非另有說(shuō)明，否則所有未使用的儲(chǔ)備溶液應(yīng)分為一次性使用的等分試樣，并在制備后儲(chǔ)存在-20°C下。避免重復(fù)凍融循環(huán)。

1. Stain It™Violet 450儲(chǔ)備溶液（500X）：
將200 µL DMSO（組分B）添加到Stain It™Violet 450（組分A）小瓶中，制成500X Stain It™Violet 450儲(chǔ)備溶液。

程序

表1.  流式細(xì)胞儀分析的熒光光譜特性和激發(fā)激光

1. 使用1X Hanks和20 mM Hepes緩沖液（HHBS）或您選擇的無(wú)血清/蛋白質(zhì)的緩沖液制備細(xì)胞。
    
2. 用HHBS或您選擇的無(wú)血清/蛋白質(zhì)的緩沖液洗滌細(xì)胞一次。
    
3. 以5-10×10 ⁶ / mL的濃度在HHBS或您選擇的無(wú)血清/蛋白質(zhì)的緩沖液中重懸細(xì)胞
    
4. 將1 µL 500X Stain It™Violet 450儲(chǔ)備液添加到0.5 mL細(xì)胞/測(cè)定中，并充分混合。
    
5. 在避光的條件下，于室溫或37°C，5％CO _2的培養(yǎng)箱中孵育20-60分鐘。注意：應(yīng)通過實(shí)驗(yàn)確定不同細(xì)胞系的*染色濃度和孵育時(shí)間。
6. 洗滌細(xì)胞兩次，然后用HHBS或您選擇的緩沖液重懸細(xì)胞。
    
7. 根據(jù)需要固定單元格（可選）。
    
8. 使用適當(dāng)?shù)募ぐl(fā)/發(fā)射濾光片，使用流式細(xì)胞儀和/或熒光顯微鏡分析細(xì)胞（參見表1）。

圖片

圖1.通過Live或Dead™固定死細(xì)胞染色試劑盒（Cat＃22500）檢測(cè)Jurkat細(xì)胞活力。處理Jurkat細(xì)胞并用Stain It™Violet 450染色，然后固定在3.7％甲醛中，并通過流式細(xì)胞儀進(jìn)行分析?；罴?xì)胞（紅色），經(jīng)星形孢菌素處理的細(xì)胞（綠色）和經(jīng)熱處理的細(xì)胞（藍(lán)色）通過太平洋藍(lán)通道進(jìn)行區(qū)分。

圖2.用甲醛固定并用Live或Dead™可固定死細(xì)胞染色試劑盒* 405 nm激發(fā)藍(lán)色熒光*的Cola黑墻/透明底部96孔板中染色的Hela細(xì)胞圖像。