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草酰乙酸是檸檬酸循環(huán)的重要組成部分，它與乙酰fumeiA反應(yīng)生成檸檬酸。它還參與糖異生，尿素循環(huán)，乙醛酸循環(huán)，氨基酸合成和脂肪酸合成。草酰乙酸的缺乏限制了糖異生和尿素循環(huán)功能，并可能導(dǎo)致能量產(chǎn)生減少。草酰乙酸也可用作血液guansuan清除劑，在顱腦損傷后提供神經(jīng)保護(hù)作用，表現(xiàn)為海馬神經(jīng)元減少和神經(jīng)功能改善。Amplite™熒光草酰乙酸測(cè)定試劑盒提供了靈敏的定量生物樣品中草酰乙酸的測(cè)定方法。草酰乙酸通過(guò)酶偶聯(lián)反應(yīng)轉(zhuǎn)化為丙酮酸，生成過(guò)氧化氫。
| 熒光酶標(biāo)儀 | |
| 激發(fā) | 540納米 |
| 發(fā)射 | 590納米 |
| 隔斷 | 570納米 |
| 推薦板 | 純黑色 |
| 組件A：Amplite™紅色底物（光敏） | 1個(gè)小瓶 |
| 組分B1：酶混合物1 | 2瓶（凍干粉） |
| 組分B2：酶混合物2 | 2瓶（凍干粉） |
| 組分C：測(cè)定緩沖液 | 1瓶（20毫升） |
| 成分D：草酰乙酸去氧羧化酶（OAC） | 2瓶（凍干粉） |
| 組分E：草酰乙酸標(biāo)準(zhǔn) | 1小瓶（凍干粉） |
| 成分F：DMSO | 1小瓶（100 µL） |
準(zhǔn)備草酰乙酸標(biāo)準(zhǔn)品或測(cè)試樣品（50 µL）
加入草酰乙酸工作溶液（50 µL）
在室溫下孵育30-60分鐘
監(jiān)控Ex / Em = 540/590 nm（截止= 570 nm）的熒光增加
重要說(shuō)明
開(kāi)始實(shí)驗(yàn)前，在室溫下解凍每個(gè)試劑盒成分的小瓶。
儲(chǔ)備溶液的制備
除非另有說(shuō)明，否則所有未使用的儲(chǔ)備溶液應(yīng)分為一次性使用的等分試樣，并在制備后儲(chǔ)存在-20°C下。避免重復(fù)凍融循環(huán)。
1.草酰乙酸標(biāo)準(zhǔn)溶液（100 mM）：
將100 µL ddH 2 O加入草酰乙酸標(biāo)準(zhǔn)溶液（組分E）中，制成100 mM草酰乙酸標(biāo)準(zhǔn)溶液。
2. Amplite™紅色底物儲(chǔ)備液（200X）：
將50 µL DMSO（組分F）添加到Amplite™紅色底物（組分A）中，制成200X Amplite™紅色底物儲(chǔ)備液。
3. O xooloacetate Decarboxcylase（OAC）儲(chǔ)備溶液（100X）：
將50 µL ddH 2 O 添加到草酰乙酸Decarboxcylase（組分D）中，制成100X草酰乙酸Decarboxcylase儲(chǔ)備溶液。
配制標(biāo)準(zhǔn)溶液
為了方便起見(jiàn)，請(qǐng)使用我們的系列稀釋計(jì)
將10μL的100 mM草酰乙酸標(biāo)準(zhǔn)溶液添加到990μL的測(cè)定緩沖液（組分C）中，以獲得1 mM的草酰乙酸標(biāo)準(zhǔn)溶液。取1 mM草酰乙酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，并在測(cè)定緩沖液（組分C）中以1:10的比例制備100 µM草酰乙酸標(biāo)準(zhǔn)溶液（SD7）。取100 µM草酰乙酸標(biāo)準(zhǔn)溶液（SD7），并在測(cè)定緩沖液（組分C）中進(jìn)行1：3系列稀釋?zhuān)缘玫较盗邢♂尩牟蒗Ｒ宜針?biāo)準(zhǔn)溶液 （SD6-SD1）。
準(zhǔn)備工作溶液
1. 將5mL測(cè)定緩沖液（組分C）添加到一個(gè)Enzyme Mix1瓶（組分B1）中，并充分混合。
2. 將100μLddH2O加入一個(gè)Enzyme Mix2小瓶（組分B2）中并充分混合。
3.將25μL的200X Amplite™Red儲(chǔ)備液，50μL的100X OAC儲(chǔ)備液以及整個(gè)小瓶（100μL）的Enzyme Mix2轉(zhuǎn)移到Enzyme Mix1瓶中，充分混合以制成草酰乙酸工作溶液。注意： 此草酰乙酸工作溶液不穩(wěn)定，請(qǐng)立即使用，并避免直接暴露在光線下。
程序
表1. 黑色96孔微孔板中草酰乙酸標(biāo)準(zhǔn)品和測(cè)試樣品的布局。SD =草酸乙二酸酯標(biāo)準(zhǔn)品（SD1-SD7，0.1至100 µM），BL =空白對(duì)照，TS =測(cè)試樣品。
| BL | BL | TS | TS |
| SD1 | SD1 | ... | ... |
| SD2 | SD2 | ... | ... |
| SD3 | SD3 | ||
| SD4 | SD4 | ||
| SD5 | SD5 | ||
| SD6 | SD6 | ||
| SD7 | SD7 |
表2. 每個(gè)孔的試劑組成。
| 好 | 體積 | 試劑 |
| SD1-SD7 | 50微升 | 連續(xù)稀釋液（0.1至100 µM） |
| BL | 50微升 | 分析緩沖液（組分C） |
| TS | 50微升 | 測(cè)試樣本 |
根據(jù)表1和2中提供的布局，準(zhǔn)備草酰乙酸標(biāo)準(zhǔn)品（SD），空白對(duì)照（BL）和測(cè)試樣品（TS）。對(duì)于384孔板，每孔使用25 µL試劑代替50 µL。
將50 µL草酰乙酸工作溶液添加到草酰乙酸標(biāo)準(zhǔn)品，空白對(duì)照和測(cè)試樣品的每個(gè)孔中，使草酰乙酸的總測(cè)定體積為100 µL /孔。對(duì)于384孔板，應(yīng)在每個(gè)孔中加入25 µL草酰乙酸工作溶液，總體積為50 µL /孔。注意： 在pH 6.5至7.0下運(yùn)行草酰乙酸測(cè)定。
在避光條件下，于室溫下孵育反應(yīng)30-60分鐘。
使用熒光板讀數(shù)器在Ex / Em = 540/590 nm（截止= 570 nm）處監(jiān)控?zé)晒獾脑黾印?/p>
13840 Amplite™比色法草酰乙酸檢測(cè)試劑盒 Amplite™ Colorimetric Oxaloacetate Assay Kit *Red Color* 200 Tests 13841 Amplite™熒光法草酰乙酸檢測(cè)試劑盒*紅色熒光* Amplite™ Fluorimetric Oxaloacetate Assay Kit *Red Fluorescence* 200 Tests 13842 Amplite™比色法huangpiaoling檢測(cè)試劑盒 Amplite™ Colorimetric Xanthine Assay Kit 200 Tests 13843 Amplite™熒光法huangpiaoling檢測(cè)試劑盒 Amplite™ Fluorimetric Xanthine Assay Kit 200 Tests
