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安全數(shù)據(jù)表
協(xié)議
另請參閱：酶，氧化酶，細胞代謝，細胞過程，活性氧（ROS）
黃嘌呤氧化酶（XO）是一種催化次黃嘌呤氧化為黃嘌呤并可以進一步催化黃嘌呤氧化為尿酸的酶。它在嘌呤的分解代謝中起重要作用。黃嘌呤氧化酶通常在肝臟和空腸中發(fā)現(xiàn)。在嚴重肝損傷期間，黃嘌呤氧化酶釋放到血液中，因此對XO進行血液分析是確定是否發(fā)生肝損傷的一種方法。黃嘌呤尿癥是一種罕見的遺傳疾病，缺乏黃嘌呤氧化酶會導致血液中的黃嘌呤濃度高，并可能導致健康問題，例如腎衰竭。Amplite™熒光黃嘌呤氧化酶測定試劑盒提供了一種快速，超靈敏的方法來測定黃嘌呤氧化酶活性。它可以以方便的96孔或384孔微量滴定板形式進行，無需分離步驟即可輕松實現(xiàn)自動化。在該測定中，黃嘌呤氧化酶催化嘌呤堿，次黃嘌呤或黃嘌呤氧化為尿酸和超氧化物，然后尿素和過氧化物會自發(fā)降解為過氧化氫（H2O2）。該套件使用我們的Amplite™Red底材，可實現(xiàn)雙重記錄模式。熒光信號可通過熒光酶標儀或吸光度酶標儀輕松讀取。使用Amplite™黃嘌呤氧化酶測定試劑盒，在100 µL反應體積中，我們檢測到低至0.15 mU / mL黃嘌呤氧化酶。會自發(fā)降解為過氧化氫（H2O2）。該套件使用我們的Amplite™Red底材，可實現(xiàn)雙重記錄模式。熒光信號可通過熒光酶標儀或吸光度酶標儀輕松讀取。使用Amplite™黃嘌呤氧化酶測定試劑盒，在100 µL反應體積中，我們檢測到低至0.15 mU / mL黃嘌呤氧化酶。會自發(fā)降解為過氧化氫（H2O2）。該套件使用我們的Amplite™Red底材，可實現(xiàn)雙重記錄模式。熒光信號可通過熒光酶標儀或吸光度酶標儀輕松讀取。使用Amplite™黃嘌呤氧化酶測定試劑盒，在100 µL反應體積中，我們檢測到低至0.15 mU / mL黃嘌呤氧化酶。
平臺
| 熒光酶標儀 | |
| 激發(fā) | 540納米 |
| 發(fā)射 | 590納米 |
| 隔斷 | 570納米 |
| 推薦板 | 純黑色 |
組件
| 成分A：Amplite™紅色（光敏） | 1個小瓶 |
| 組分B：測定緩沖液 | 1瓶（20毫升） |
| 組分C：辣根過氧化物酶 | 1小瓶（凍干） |
| 成分D：黃嘌呤 | 1小瓶（100 µL，100 X） |
| 組分E：黃嘌呤氧化酶標準品 | 1小瓶（200 mU，凍干） |
| 成分F：DMSO | 1小瓶（200 µL） |
協(xié)議范例
乍看上去
協(xié)議摘要
- XO標準品或測試樣品（50 µL）
- 添加XO工作溶液（50 µL）
- 在室溫下孵育15-30分鐘
- 在Ex / Em = 540/590 nm處讀取熒光強度（截止570 nm）
重要說明
在開始實驗之前，將所有套件組件解凍至室溫。
儲備溶液的制備
除非另有說明，否則所有未使用的儲備溶液應分為一次性使用的等分試樣，并在制備后儲存在-20°C下。避免重復凍融循環(huán)。
1. Amplite™Red儲備液（250X）：
將40 µL DMSO（組分F）添加到Amplite™Red底物（組分A）的小瓶中。儲備溶液應及時使用。注意：在硫醇（例如二硫蘇糖醇（DTT））存在下，Amplite™Red底物不穩(wěn)定。反應中DTT的終濃度應不高于10 µM。Amplite™Red底物在高pH（> 8.5）下也不穩(wěn)定。因此，該反應應在pH = 7 – 8下進行。建議使用提供的測定緩沖液，pH = 7.4。
2. HRP儲備溶液（500X）：
將100 µL測定緩沖液（組分B）添加到辣根過氧化物酶（組分C）小瓶中。
3.黃嘌呤氧化酶（XO）標準溶液（1 U / mL）
將200 µL測定緩沖液（組分B）加入小瓶黃嘌呤氧化酶標準品（E）。
配制標準溶液
為了方便起見，請使用我們的系列稀釋計
將10 µL的1 U / mL XO標準溶液加到990 µL的測定緩沖液（組分B）中，制成10 mU / mL的XO標準溶液（XO7）。進行1：3系列稀釋，以得到剩余的系列稀釋XO標準液（XO6-XO1）。
準備工作溶液
將20μL的Amplite™Red儲備液（250X），10μL的HRP儲備液（500X）和50μL的黃嘌呤（100X，組分D）加入5 mL的測定緩沖液（組分B）中，使總體積為5.08 mL黃嘌呤氧化酶（XO）工作溶液。避光。
程序
表1.黑色96孔微孔板中XO標準品和測試樣品的布局。
| BL | BL | TS | TS |
| XO1 | XO1 | ... | ... |
| XO2 | XO2 | ... | ... |
| XO3 | XO3 | ||
| XO4 | XO4 | ||
| XO5 | XO5 | ||
| XO6 | XO6 | ||
| XO7 | XO7 |
表2.每個孔的試劑組成。
| 好 | 體積 | 試劑 |
| XO1-XO7 | 50微升 | 連續(xù)稀釋（0.01至10 mU / mL） |
| BL | 50微升 | 分析緩沖液（組分B） |
| TS | 50微升 | 樣品 |
- 根據(jù)表1和表2提供的布局，將XO標準液（XO），空白對照（BL）和測試樣品（TS）制備成黑色的96孔微孔板。對于384孔板，請使用25 µL每孔試劑，而不是50 µL。
- 在XO標準品，空白對照和測試樣品的每個孔中加入50 µL XO工作溶液，以使XO測定總體積為100 µL /孔。對于384孔板，請向每個孔中添加25 µL XO工作溶液，總體積為50 µL /孔。
- 在避光條件下，室溫下將反應孵育15至30分鐘。
- 使用熒光板讀數(shù)器在激發(fā)= 530-570 nm，發(fā)射= 590-600 nm（*Ex / Em = 540/590 nm），截止= 570 nm的條件下監(jiān)控熒光強度。
11305 Amplite™比色法超氧化物歧化酶（SOD）檢測試劑盒 Amplite™ Colorimetric Superoxide Dismutase (SOD) Assay Kit 1 kit 11306 Amplite™熒光法過氧化氫酶檢測試劑盒 *紅色熒光* Amplite™ Fluorimetric Catalase Assay Kit *Red Fluorescence* 1 kit
