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安全數(shù)據(jù)表
協(xié)議
另請(qǐng)參閱：酶，氧化酶，細(xì)胞代謝，細(xì)胞過(guò)程，活性氧（ROS）
黃嘌呤氧化酶（XO）是一種催化次黃嘌呤氧化為黃嘌呤并可以進(jìn)一步催化黃嘌呤氧化為尿酸的酶。它在嘌呤的分解代謝中起重要作用。黃嘌呤氧化酶通常在肝臟和空腸中發(fā)現(xiàn)。在嚴(yán)重肝損傷期間，黃嘌呤氧化酶釋放到血液中，因此對(duì)XO進(jìn)行血液分析是確定是否發(fā)生肝損傷的一種方法。黃嘌呤尿癥是一種罕見(jiàn)的遺傳疾病，缺乏黃嘌呤氧化酶會(huì)導(dǎo)致血液中的黃嘌呤濃度高，并可能導(dǎo)致健康問(wèn)題，例如腎衰竭。Amplite™熒光黃嘌呤氧化酶測(cè)定試劑盒提供了一種快速，超靈敏的方法來(lái)測(cè)定黃嘌呤氧化酶活性。它可以以方便的96孔或384孔微量滴定板形式進(jìn)行，無(wú)需分離步驟即可輕松實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化。在該測(cè)定中，黃嘌呤氧化酶催化嘌呤堿，次黃嘌呤或黃嘌呤氧化為尿酸和超氧化物，然后尿素和過(guò)氧化物會(huì)自發(fā)降解為過(guò)氧化氫（H2O2）。該套件使用我們的Amplite™Red底材，可實(shí)現(xiàn)雙重記錄模式。熒光信號(hào)可通過(guò)熒光酶標(biāo)儀或吸光度酶標(biāo)儀輕松讀取。使用Amplite™黃嘌呤氧化酶測(cè)定試劑盒，在100 µL反應(yīng)體積中，我們檢測(cè)到低至0.15 mU / mL黃嘌呤氧化酶。會(huì)自發(fā)降解為過(guò)氧化氫（H2O2）。該套件使用我們的Amplite™Red底材，可實(shí)現(xiàn)雙重記錄模式。熒光信號(hào)可通過(guò)熒光酶標(biāo)儀或吸光度酶標(biāo)儀輕松讀取。使用Amplite™黃嘌呤氧化酶測(cè)定試劑盒，在100 µL反應(yīng)體積中，我們檢測(cè)到低至0.15 mU / mL黃嘌呤氧化酶。會(huì)自發(fā)降解為過(guò)氧化氫（H2O2）。該套件使用我們的Amplite™Red底材，可實(shí)現(xiàn)雙重記錄模式。熒光信號(hào)可通過(guò)熒光酶標(biāo)儀或吸光度酶標(biāo)儀輕松讀取。使用Amplite™黃嘌呤氧化酶測(cè)定試劑盒，在100 µL反應(yīng)體積中，我們檢測(cè)到低至0.15 mU / mL黃嘌呤氧化酶。
平臺(tái)
| 熒光酶標(biāo)儀 | |
| 激發(fā) | 540納米 |
| 發(fā)射 | 590納米 |
| 隔斷 | 570納米 |
| 推薦板 | 純黑色 |
組件
| 成分A：Amplite™紅色（光敏） | 1個(gè)小瓶 |
| 組分B：測(cè)定緩沖液 | 1瓶（20毫升） |
| 組分C：辣根過(guò)氧化物酶 | 1小瓶（凍干） |
| 成分D：黃嘌呤 | 1小瓶（100 µL，100 X） |
| 組分E：黃嘌呤氧化酶標(biāo)準(zhǔn)品 | 1小瓶（200 mU，凍干） |
| 成分F：DMSO | 1小瓶（200 µL） |
協(xié)議范例
乍看上去
協(xié)議摘要
- XO標(biāo)準(zhǔn)品或測(cè)試樣品（50 µL）
- 添加X(jué)O工作溶液（50 µL）
- 在室溫下孵育15-30分鐘
- 在Ex / Em = 540/590 nm處讀取熒光強(qiáng)度（截止570 nm）
重要說(shuō)明
在開(kāi)始實(shí)驗(yàn)之前，將所有套件組件解凍至室溫。
儲(chǔ)備溶液的制備
除非另有說(shuō)明，否則所有未使用的儲(chǔ)備溶液應(yīng)分為一次性使用的等分試樣，并在制備后儲(chǔ)存在-20°C下。避免重復(fù)凍融循環(huán)。
1. Amplite™Red儲(chǔ)備液（250X）：
將40 µL DMSO（組分F）添加到Amplite™Red底物（組分A）的小瓶中。儲(chǔ)備溶液應(yīng)及時(shí)使用。注意：在硫醇（例如二硫蘇糖醇（DTT））存在下，Amplite™Red底物不穩(wěn)定。反應(yīng)中DTT的終濃度應(yīng)不高于10 µM。Amplite™Red底物在高pH（> 8.5）下也不穩(wěn)定。因此，該反應(yīng)應(yīng)在pH = 7 – 8下進(jìn)行。建議使用提供的測(cè)定緩沖液，pH = 7.4。
2. HRP儲(chǔ)備溶液（500X）：
將100 µL測(cè)定緩沖液（組分B）添加到辣根過(guò)氧化物酶（組分C）小瓶中。
3.黃嘌呤氧化酶（XO）標(biāo)準(zhǔn)溶液（1 U / mL）
將200 µL測(cè)定緩沖液（組分B）加入小瓶黃嘌呤氧化酶標(biāo)準(zhǔn)品（E）。
配制標(biāo)準(zhǔn)溶液
為了方便起見(jiàn)，請(qǐng)使用我們的系列稀釋計(jì)
將10 µL的1 U / mL XO標(biāo)準(zhǔn)溶液加到990 µL的測(cè)定緩沖液（組分B）中，制成10 mU / mL的XO標(biāo)準(zhǔn)溶液（XO7）。進(jìn)行1：3系列稀釋，以得到剩余的系列稀釋XO標(biāo)準(zhǔn)液（XO6-XO1）。
準(zhǔn)備工作溶液
將20μL的Amplite™Red儲(chǔ)備液（250X），10μL的HRP儲(chǔ)備液（500X）和50μL的黃嘌呤（100X，組分D）加入5 mL的測(cè)定緩沖液（組分B）中，使總體積為5.08 mL黃嘌呤氧化酶（XO）工作溶液。避光。
程序
表1.黑色96孔微孔板中XO標(biāo)準(zhǔn)品和測(cè)試樣品的布局。
| BL | BL | TS | TS |
| XO1 | XO1 | ... | ... |
| XO2 | XO2 | ... | ... |
| XO3 | XO3 | ||
| XO4 | XO4 | ||
| XO5 | XO5 | ||
| XO6 | XO6 | ||
| XO7 | XO7 |
表2.每個(gè)孔的試劑組成。
| 好 | 體積 | 試劑 |
| XO1-XO7 | 50微升 | 連續(xù)稀釋（0.01至10 mU / mL） |
| BL | 50微升 | 分析緩沖液（組分B） |
| TS | 50微升 | 樣品 |
- 根據(jù)表1和表2提供的布局，將XO標(biāo)準(zhǔn)液（XO），空白對(duì)照（BL）和測(cè)試樣品（TS）制備成黑色的96孔微孔板。對(duì)于384孔板，請(qǐng)使用25 µL每孔試劑，而不是50 µL。
- 在XO標(biāo)準(zhǔn)品，空白對(duì)照和測(cè)試樣品的每個(gè)孔中加入50 µL XO工作溶液，以使XO測(cè)定總體積為100 µL /孔。對(duì)于384孔板，請(qǐng)向每個(gè)孔中添加25 µL XO工作溶液，總體積為50 µL /孔。
- 在避光條件下，室溫下將反應(yīng)孵育15至30分鐘。
- 使用熒光板讀數(shù)器在激發(fā)= 530-570 nm，發(fā)射= 590-600 nm（*Ex / Em = 540/590 nm），截止= 570 nm的條件下監(jiān)控?zé)晒鈴?qiáng)度。
11305 Amplite™比色法超氧化物歧化酶（SOD）檢測(cè)試劑盒 Amplite™ Colorimetric Superoxide Dismutase (SOD) Assay Kit 1 kit 11306 Amplite™熒光法過(guò)氧化氫酶檢測(cè)試劑盒 *紅色熒光* Amplite™ Fluorimetric Catalase Assay Kit *Red Fluorescence* 1 kit
