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α-酮戊二酸（α-酮戊二酸）是克雷布斯循環(huán)中的關(guān)鍵分子，決定了生物體檸檬酸循環(huán)的總體速率。作為guansuan和guanxianan的前體，α-酮戊二酸也是胃腸道細(xì)胞的主要代謝燃料。它可以減少蛋白質(zhì)分解代謝并增加蛋白質(zhì)合成，從而增強(qiáng)骨骼肌中骨骼組織的形成，可用于臨床。α-酮戊二酸酯用于腎臟疾??；腸胃疾病，包括細(xì)菌感染；肝臟問題；白內(nèi)障; 和反復(fù)出現(xiàn)的酵母菌感染。它還用于改善接受血液透析治療的腎臟患者處理蛋白質(zhì)的方式。AAT Bioquest' s Amplite™比色α-酮戊二酸定量試劑盒提供了靈敏的比色測定法，用于定量生物樣品中的α-酮戊二酸。它利用酶偶聯(lián)反應(yīng)釋放過氧化氫，可通過Amplite™Red在570 nm吸光度酶標(biāo)儀中檢測到。
| 熒光酶標(biāo)儀 | |
| 激發(fā) | 540納米 |
| 發(fā)射 | 590納米 |
| 隔斷 | 570納米 |
| 推薦板 | 純黑色 |
| 成分A：Amplite™紅色 | 1個(gè)小瓶 |
| 組分B1：酶混合物1 | 2瓶（凍干粉） |
| 組分B2：酶混合物2 | 2瓶（凍干粉） |
| 組分C：測定緩沖液 | 1瓶（10毫升） |
| 成分D：α-酮戊二酸標(biāo)準(zhǔn) | 1小瓶（10 mM，100 µL） |
| 成分E：DMSO | 1小瓶（100 µL） |
準(zhǔn)備α-酮戊二酸標(biāo)準(zhǔn)品或測試樣品（50 µL）
加入α-酮戊二酸測定工作溶液（50 µL）
在37oC下孵育30至60分鐘
在Ex / Em = 540/590 nm時(shí)讀取熒光強(qiáng)度
重要說明
在開始實(shí)驗(yàn)之前，將所有套件組件解凍至室溫。
儲(chǔ)備溶液的制備
除非另有說明，否則所有未使用的儲(chǔ)備溶液應(yīng)分為一次性使用的等分試樣，并在制備后儲(chǔ)存在-20°C下。避免重復(fù)凍融循環(huán)。
Amplite™Red儲(chǔ)備液（200X）：
將50 µL DMSO（組分E）加入一小瓶Amplite™Red（組分A）中，并充分混合。注意：將未使用的Amplite™Red儲(chǔ)備液（200X）儲(chǔ)存在-20oC下，避免光照和反復(fù)凍融。
配制標(biāo)準(zhǔn)溶液
為了方便起見，請(qǐng)使用我們的系列稀釋計(jì)
進(jìn)行1：3系列稀釋，以得到約30、10、3、1、0.3和0.1μM系列稀釋的α-酮戊二酸標(biāo)準(zhǔn)品。
準(zhǔn)備工作溶液
α-酮戊二酸測定工作溶液：
將5 mL測定緩沖液（組分C）加入一瓶酶混合1瓶（組分B1）中，并充分混合。將100μLddH 2 O加入一個(gè)酶混合2小瓶（組分B2）中并充分混合。將整個(gè)小瓶（100μL）的酶混合物2和25 µL的200X Amplite™Red儲(chǔ)備液（200X）轉(zhuǎn)移到小瓶的酶混合物1中，并充分混合。注意： 5 mL工作溶液足以用于一塊96孔板。它不穩(wěn)定，請(qǐng)及時(shí)使用。
程序
表1. 黑色96孔微孔板中α-酮戊二酸標(biāo)準(zhǔn)品和測試樣品的布局。AKG =α-酮戊二酸標(biāo)準(zhǔn)溶液（AKG1-AKG7，0.1至100 µM），BL =空白對(duì)照，TS =測試樣品。
| BL | BL | TS | TS |
| AKG1 | AKG1 | ... | ... |
| AKG2 | AKG2 | ... | ... |
| AKG3 | AKG3 | ||
| AKG4 | AKG4 | ||
| AKG5 | AKG5 | ||
| AKG6 | AKG6 | ||
| AKG7 | AKG7 |
表2. 每個(gè)孔的試劑組成。
| 好 | 體積 | 試劑 |
| AKG1-AKG7 | 50微升 | 連續(xù)稀釋液（0.1至100 µM） |
| BL | 50微升 | 分析緩沖液（組分C） |
| TS | 50微升 | 測試樣本 |
根據(jù)表1和表2提供的布局，準(zhǔn)備α-酮戊二酸標(biāo)準(zhǔn)品（AKG），空白對(duì)照（BL）和測試樣品（TS）。對(duì)于384孔板，每孔使用25 µL試劑代替50 µL 。
將50 µLα-酮戊二酸測定工作溶液添加到α-酮戊二酸標(biāo)準(zhǔn)品，空白對(duì)照和測試樣品的每個(gè)孔中，使總測定體積為100 µL /孔。對(duì)于384孔板，將25 µLα-酮戊二酸工作溶液添加到每個(gè)孔中，總體積為50 µL /孔。
將反應(yīng)液在37oC下孵育30-60分鐘。
使用熒光板讀數(shù)器在Ex / Em = 540/590 nm（截止= 570 nm）處監(jiān)控?zé)晒獾脑黾?/p>
Amplite™比色法α-酮戊二酸定量試劑盒 Amplite™ Colorimetric α-Ketoglutarate Quantitation Kit 200 Tests Amplite™熒光法α-酮戊二酸定量試劑盒 Amplite™ Fluorimetric α-Ketoglutarate Quantitation Kit 200 Tests Amplite™ADHP過氧化物和過氧化酶熒光探針*相當(dāng)于Amplex Red* Amplite™ ADHP [10-Acetyl-3,7-dihydroxyphenoxazine] *CAS#: 119171-73-2* 25 mg 即用型ABTS溶液 *適合HRP標(biāo)記的ELISA檢測* ReadiUse™ ABTS Substrate Solution *Optimized for ELISA Assays with HRP Conjugates* 1 L 即用型TMB溶液 *適合HRP偶聯(lián)的ELISA實(shí)驗(yàn)* ReadiUse™ TMB Substrate Solution *Optimized for ELISA Assays with HRP Conjugates* 1 L
