純化步驟：

1. 腹水離心：12000 rpm、離心 6 分鐘，用 1ml 移液槍將上清小心吸出（注意避免吸到沉淀和表面油狀漂浮物）。

2. 往離心好的腹水里加入 20mM pH7.0 的磷酸鈉進(jìn)行稀釋?zhuān)a(bǔ)足至 4ml，顛倒 15ml 管 10次混合均勻。（稀釋后若發(fā)現(xiàn)有沉淀需再次離心。）對(duì)于大于 6ml 樣品，往離心好的腹水里加入等體積 20mM pH7.0 的磷酸鈉進(jìn)行稀釋?zhuān)?/span>顛倒 15ml 管 10 次混合均勻。

3. 在離心腹水的過(guò)程中，取出 protein G 柱，室溫平衡 5 分鐘，用 5 倍柱體積的滅菌二級(jí)水沖洗，然后用 20mM pH7.0 的磷酸鈉 5 倍柱體積平衡 protein G 柱。

注意：在第一次用二級(jí)水沖洗的時(shí)候，用一根一次性吸管將每根柱子中的填料吹起混勻，以使每根柱子的流速盡量一致。

4. 待 20mM pH7.0 的磷酸鈉流盡后，一次性吸管吸取離心稀釋后的腹水小心加到 protein G柱子里，注意保持凝膠介質(zhì)表面的平整。流穿收集到 15 ml 離心管里。

5. 20mM pH7.0 的磷酸鈉 10 倍柱體積洗滌柱子。

6. 洗脫收集管準(zhǔn)備：在洗滌柱子的同時(shí)，準(zhǔn)備 2ml 離心管 2 個(gè)（第一根收 1.5ml 抗體，第二根收 1ml抗體），標(biāo)記 ‘01/02’（01 代表第一根收 1.5ml 抗體的收集管，02 代表收 1ml 抗體的收集管）。并預(yù)先分別在 2 個(gè)收集管里加入 75/50ul 1M Tris-HCl pH 9.0 +180/120ul 抗體保護(hù)液。

抗體洗脫：

等 20mM pH7.0 的磷酸鈉流盡后，加入 800ul 的 0.1M ganansuan溶液，不收集此 0.8 ml 洗脫液，再用 0.1M ganansuan溶液（pH 2.5）2.5ml 進(jìn)行洗脫。（1.5ml+1ml）。

收集結(jié)束立刻上下顛倒 EP 管進(jìn)行混勻，用 pH 試紙測(cè)試洗脫液是否為中性，然后將洗脫好的抗體放置于冰上。

對(duì)于腹水體積在 2-4ml 的樣品，選擇兩個(gè) 1ml 填料柱子純化。

若腹水體積 V，4ml＜V≤10ml,則選用 3ml 柱填料的大 PG 柱純化，純化方法和步驟與上述一致，洗脫時(shí)先加入 1.5ml 的 0.1M ganansuan溶液，不收集此 1.5 ml 洗脫液

在洗滌柱子的同時(shí)，準(zhǔn)備 15ml 離心管，預(yù)先在每個(gè)洗脫液收集管里加入 300ul 1MTris-HCl pH 9.0 +660ul 抗體保護(hù)液。

用 6ml 的 0.1M ganansuan溶液（pH 2.5）洗脫，收集洗脫液。收集結(jié)束立刻上下顛倒 EP管進(jìn) 行混勻，用 pH 試紙測(cè)試洗脫液是否為中性，然后將洗脫好的抗體放置于冰上。

5.3.9 洗脫完畢后，對(duì)柱子的處理是，再次往 Protein G 柱里加入 6 倍柱體積的 0.1M ganansuan溶液（pH 2.5）chedi洗脫柱子，等ganansuan溶液（pH 2.5）流盡，加入 20mM pH7.0 的磷 酸鈉 5 倍柱體積清洗柱子。然后用去離子水 5 倍柱體積清洗柱子，接著用 20% 乙醇 2 倍柱體積清洗柱子，流盡后，柱子底端蓋緊帽子，加入 2 倍柱體積 20%乙醇 4℃保存柱子。