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廈門海葒興儀器股份有限公司
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更新時間:2022-03-19 11:27:05瀏覽次數(shù):242次
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試劑配制
① 緩沖液:將緩沖液試劑袋中的試劑倒出,溶于500ml 蒸餾水中,溶解、混勻即可。
② 底物:按需添加的底物量,向標有“底物"的試劑瓶中加入蒸餾水溶解、混勻即可。0~5oC環(huán)境下冷藏保存。
底物添加量為20ul時,應往標注為底物的瓶中加入2.7ml蒸餾水;
底物添加量為100ul時,應往標注為底物的瓶中加入13ml蒸餾水。
③ 顯色劑:無需配制放入冰箱冷藏(0~5℃),切勿冷凍結冰。
④ 酶試劑:酶試劑已配成溶液可直接使用。平常要在0~5oC環(huán)境條件下冷藏保存,切勿冷凍至結冰?。?!
操作步驟
1.樣品前處理:
(1 (1) ①植株:稱取2g樣品(葉菜剪成寬度為1厘米的菜樣,塊根菜取1厘米左右的表皮樣品)放入三角瓶中,加入10ml緩沖液后,振蕩提取2分鐘;
②茶葉:稱取0.5g茶葉樣品,加入5ml丙酮,振蕩提取5分鐘;取0.2ml上述丙酮溶液,40~50℃水浴蒸干;加入2.5ml緩沖液,振蕩2分鐘;(自備丙酮)
(2) 若浸提液清澈無色或顏色較淺,取上清液待測;
若浸提液混濁,離心,取上清液待測;
若浸提液色素干擾嚴重,可用活性炭脫色,具體方法如下:
將浸提液轉移至另一個三角瓶中,加入0.1~0.5g活性碳(根據(jù)顏色深淺調整),水浴70℃加熱5分鐘,取出趁熱過濾,濾液待測。
[備注]:蔥、蒜、蘿卜、韭菜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇及番茄汁液中含有對酶有影響的植物次生物質,容易產(chǎn)生假陽性。處理這類樣品時,可采取整株(體)浸提,避免次生物物質干擾。
2.檢測樣品的制備:
(1) 空白對照液:
①取酶100ul,緩沖液2.5ml,加入專用反應瓶中,混勻靜置10分鐘后,再加入顯色劑100ul。
②加入底物20ul(或100ul);
③搖勻后立即測試。
(2) 檢測樣品液:
①取酶100ul,待測樣品液2.5ml,加入專用反應瓶中,混勻靜置10分鐘后,再加入顯色劑100ul。
②加入底物20ul(或100ul);
③搖勻后立即測試。
3 檢測樣品測試:
(1) 空白對照測量:
① 取2.5ml對照樣品于比色皿中;
② 將比色皿放入的通道中;
③ 按“對照"鍵,屏幕下方顯示測量時間;
④ 檢測結束后,儀器自動顯示對照樣品的測試結果△Ao。
[備注]:a 當空白對照值在0.15-0.3之間時,可繼續(xù)做實驗;
b 當空白對照值在<0.15時,需重做空白對照,若重復多次的空白對照值<0.15時,必須更換酶試劑。
c 當空白對照值在>0.3時,要調試減少儀器的測量時間,重新做空白對照。
(2) 樣品測量:
① 取2.5ml待測樣品于比色皿中;
② 將比色皿放入的通道中;
③ 按“樣品"鍵,屏幕下方顯示測量時間;
④ 檢測結束后,儀器自動顯示通道檢測樣品的測試結果△Ai。
判斷標準
(1) 樣品的抑制率在40~50%之間為可疑農(nóng)殘超標樣品;
(2) 抑制率>50%為農(nóng)殘超標樣品,表明被測樣品的農(nóng)藥殘留毒性可能超過安全的界定標準,建議用氣相色譜等儀器分析法作進一步確認。
注意事項
① 加入底物后,應迅速混勻,立即測試。
② 測試前根據(jù)需添加底物的量對底物進行稀釋:
③ 所用的檢測液對皮膚均具有不同程度的傷害,使用時請做好防護。不慎沾到皮膚應立即擦干并用大量水沖洗。
檢測試劑請務必在2~4℃冰箱保存。
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