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南京億迅生物科技有限公司
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更新時(shí)間：2019-11-07 13:57:16瀏覽次數(shù)：546
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乙醇脫氫酶(ADH)檢測(cè)試劑盒
測(cè)定原理：
ADH催化NADH還原乙醛生成乙醇和NAD+，NADH在340nm處有吸收峰，而NAD+沒(méi)有；測(cè)定340nm 吸光度下降速率，來(lái)計(jì)算ADH活性。
自備儀器和用品：
研缽、冰、低溫離心機(jī)、紫外分光光度計(jì)/、微量石英比色皿/96孔板、可調(diào)式移液器和蒸餾水。
試劑組成和配制：
試劑一：液體×1瓶，室溫保存。
試劑二：液體×1瓶，4℃保存。臨用前把試劑三轉(zhuǎn)移到試劑二中，4℃保存。
試劑三：粉劑×1瓶，－20℃保存。
試劑四：液體×1支，4℃保存。
粗酶液提取：
1、稱取約0.1g樣品，加試劑一1ml，冰上充分研磨，16000g 4℃離心20min，取上清待測(cè)。2、血清可以直接用于測(cè)定。
ADH測(cè)定操作：
1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30 min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到340 nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑二在25℃水浴中保溫30 min以上。
3. 空白管：在微量石英比色皿/96孔板中依次加入20μL蒸餾水、160μL試劑二和20μL試劑四，迅速混勻后于340nm測(cè)定吸光值變化，分別記錄15s和75s時(shí)吸光值，分別記為A1和A2。△A空白管=A1-A2。空白管只需做1~2個(gè)。
4. 測(cè)定管：在微量石英比色皿/96孔板中依次加入20μL上清液、160μL試劑二和20μL試劑四，迅速混勻后于340nm測(cè)定吸光值變化，分別記錄15s和75s時(shí)吸光值，分別記為A3和A4。△A測(cè)定管=A3-A4。
乙醇脫氫酶(ADH)檢測(cè)試劑盒
