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南京億迅生物科技有限公司
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更新時間：2019-11-07 14:03:26瀏覽次數(shù)：544
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苯胺-4羥化酶(AH)檢測試劑盒
測定意義：
細胞色素P450酶是一組主要存在于肝臟的同工酶，在外源物質代謝中具有重要作用，尤其是藥物和毒物的代謝。AH在P450酶系中相當于CYP2E1亞型，CYP2E1不僅參與了藥物的代謝，而且還能催化多種前致癌物和前毒物的活化過程。
自備儀器和用品：
酶標儀、普通離心機，低溫超速離心機、可調(diào)式移液槍、酶標板和冰。
試劑組成和配置：
試劑一：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前加入100 mL蒸餾水，充分溶解。
試劑二：液體×1瓶，4℃保存。
試劑三：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前加入10 mL蒸餾水，充分溶解。
試劑四：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前加入2600 μL蒸餾水，充分溶解。
試劑五：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前加入10 mL蒸餾水，充分溶解。
試劑六：粉劑×1瓶（腐蝕性試劑），4℃避光保存。臨用前加入5mL蒸餾水，充分溶解。
試劑七：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前加入5 mL蒸餾水，充分溶解。
標準液：液體×1瓶，10μmol/L，4℃避光保存。
粗酶液提取：
1. 除去細胞核和線粒體等：稱約0.2 g組織，加入4℃預冷的500 μ L試劑一，冰上充分研磨，10 000g 4℃離心30min，取上清液，轉移到超速離心管中。
2. 粗制微粒體：4℃，100 000g，離心60min，棄上清液。
3. 除血紅蛋白等雜質：向步驟2的沉淀中加500 μ L試劑一，蓋緊后充分震蕩溶解，100 000g離心30min，棄上清液。
4. 終微粒體：向步驟3的沉淀中加試劑二200 μ L，蓋緊后充分震蕩溶解，4℃保存待測。
測定：
1. 酶標儀預熱30 min以上，調(diào)節(jié)波長到630 nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑三置于37℃水浴中預熱30min以上。
3. 試劑五置于冰浴預冷30min以上。
4. 標準孔：在酶標板標準孔中，依次加入100μL 標準液，50μL試劑六，50μL試劑七，混勻后室溫靜置30min，于630 nm測定光吸收，記為A標準孔。
5. 空白孔：取1支0.5 mL EP管，加入50μL粗酶液，100μL試劑三，50μL蒸餾水，混勻后37℃水浴中保溫30min；再加入100μL試劑五，混勻后冰浴5min，11000rpm，4℃，離心10min；在酶標板空白孔中依次加入100μL上清液，50μL試劑六，50μL試劑七，混勻后室溫靜置30min，于630 nm測定光吸收，記為A空白管。
6. 測定孔：取1支0.5 mL EP管，加入50μL粗酶液，100μL試劑三，50μL試劑四，混勻后37℃水浴中保溫30min；再加入100μL試劑五，混勻后冰浴5min，11000rpm，4℃，離心10min；在酶標板空白孔中依次加入100μL上清液，50μL試劑六，50μL試劑七，混勻后室溫靜置30min，于630 nm測定光吸收，記為A空白管。
苯胺-4羥化酶(AH)檢測試劑盒
