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南京億迅生物科技有限公司
主營產(chǎn)品： 質(zhì)控樣品,人工血清,人工胃液,elisa試劑盒,化學(xué)試劑,生物試劑 |
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| 參考價(jià) | ￥ 350 | ￥ 260 |
| 訂貨量 | 1 件 | 5 件 |
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- 所在地 南京市
更新時(shí)間：2019-11-07 14:04:20瀏覽次數(shù)：515
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胞漿異檸檬酸脫氫酶(ICDHc)檢測試劑盒
測定原理：
利用ICDHc催化NADP+還原成NADPH反應(yīng)，在340 nm下測定NADPH濃度的增加。
所需的儀器和用品:
紫外分光光度計(jì)、恒溫水浴鍋、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制：
提取液：60mL×1瓶，4℃保存；
試劑一：液體50 mL×1瓶，4℃保存；
試劑二：粉劑×2支，4℃保存；用時(shí)每支加275μL雙蒸水充分溶解備用；
試劑三：粉劑ⅹ2支，-20℃保存；用時(shí)每支加275μL雙蒸水充分溶解備用；
樣本的前處理：
1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備：
細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照每200萬細(xì)菌或細(xì)胞加入400μL提取液，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（功率20％，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
組織：稱取約0.1g組織，加入1mL提取液進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
2、血清（漿）樣品：直接檢測。
測定操作表：
試劑名稱（μL） | 測定管 |
試劑一 | 750 |
試劑二 | 10 |
試劑三 | 10 |
樣本 | 30 |
將上述試劑按順序加入1 mL石英比色皿中，加樣本的同時(shí)開始計(jì)時(shí)，在340 nm波長下記錄20秒時(shí)的初始吸光度A1；迅速將比色皿連同反應(yīng)液一起放入37℃(哺乳動(dòng)物)或25℃（其它物種）水浴中，準(zhǔn)確反應(yīng)2分鐘；迅速取出比色皿并擦干，記錄2分20秒時(shí)的吸光度A2。計(jì)算ΔA=A2-A1。
注意事項(xiàng)：
1、若A2-A1大于0.5，需將酶液用提取液稀釋，使A2-A1小于0.5，可提高檢測靈敏度。
2、實(shí)驗(yàn)時(shí)，試劑二、試劑三和樣本在冰上放置，以免變性和失活；試劑一37℃或25℃水浴放置。
3、比色皿中反應(yīng)液的溫度必須保持37℃或25℃，取小燒杯一只裝入一定量的37℃或25℃蒸餾水，將此燒杯放入37℃或25℃水浴鍋中。在反應(yīng)過程中把比色皿連同反應(yīng)液放在此燒杯中。
4、兩個(gè)人同時(shí)做此實(shí)驗(yàn)，一個(gè)人比色，一個(gè)人計(jì)時(shí)，以保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
胞漿異檸檬酸脫氫酶(ICDHc)檢測試劑盒
