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南京億迅生物科技有限公司

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氨基比林-N-去甲基化酶(AND)檢測(cè)試劑盒
氨基比林-N-去甲基化酶(AND)檢測(cè)試劑盒
參考價(jià) 1000 750
訂貨量 1 5
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
  • 型號(hào)
  • 品牌
  • 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)商
  • 所在地 南京市

更新時(shí)間:2019-11-07 14:05:26瀏覽次數(shù):551

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【簡(jiǎn)單介紹】
級(jí)別 其他
測(cè)定意義:
細(xì)胞色素P450酶是一組在外源物質(zhì)代謝中,尤其是藥物和毒物,具有重要作用的酶系。AND作為P450酶系的重要一員,相當(dāng)于CYP3A4亞型,與藥物的去甲基化反應(yīng)密切相關(guān)。
測(cè)定原理:
AND催化氨基比林釋放甲醛,通過(guò)Nash比色法測(cè)定甲醛含量,即可計(jì)算出AND活性。
氨基比林-N-去甲基化酶(AND)檢測(cè)試劑盒

氨基比林-N-去甲基化酶(AND)檢測(cè)試劑盒

自備儀器和樣品:

可見(jiàn)分光光度計(jì)、普通離心機(jī),超速離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液槍、1mL玻璃比色皿、蒸餾水、無(wú)水乙醇和冰。

試劑組成和配制:

試劑一:粉劑×1瓶,4保存。臨用前加100mL蒸餾水充分溶解。

試劑二:液體×1瓶,4保存。

試劑三:粉劑×1瓶(棕色瓶),4避光保存。臨用前加入1050 μ L無(wú)水乙醇,充分溶解。

試劑四:粉劑×1瓶,4保存。臨用前加入510 μ L蒸餾水,充分溶解。

試劑五:粉劑×1瓶,室溫保存。臨用前加3600μ L蒸餾水,充分溶解。

試劑六:液體×1瓶,室溫保存。

試劑七:液體×1瓶,4保存。

標(biāo)準(zhǔn)液:液體×1瓶,-20保存。臨用前取1.5 mL EP 管,加入10 μ L標(biāo)準(zhǔn)液,加990 μ L蒸餾水,混勻即為50μmol/L標(biāo)準(zhǔn)甲醛溶液,4保存。

粗酶液提?。?/span>

1、除去細(xì)胞核,線粒體等大分子物質(zhì):稱(chēng)約0.2 g組織,加入500μL試劑一,冰上充分研磨,10 000g 4離心30min,取上清液轉(zhuǎn)入超速離心管。

2、粗制微粒體:4,100 000g,離心60min,棄上清液。

3、除血紅蛋白等雜質(zhì):向步驟2的沉淀中加500μL試劑一,蓋緊后充分震蕩溶解,100 000g離心30min,棄上清液。

4、終微粒體:向步驟3的沉淀中加試劑二200μL,蓋緊后充分震蕩溶解,即粗酶液,待測(cè)。該待測(cè)液需當(dāng)天使用。

測(cè)定:

1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30 min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到412 nm,蒸餾水調(diào)零。

2. 試劑二置于37水浴中預(yù)熱30min以上。

3. 空白孔:取1EP管,加入10μL粗酶液,170μL試劑二,10μL試劑三,10μL蒸餾水,混勻后置于37水浴保溫30min;立即加入35μL試劑五,混勻后置于冰浴中5min;取出后加入35μL試劑六,混勻后室溫靜置5min;室溫8000rpm離心5min;取新的EP管,加入100μL上清液,100μL試劑七,混勻后60水浴10min,然后取出,用冷水冷卻5min,于412nm測(cè)定光吸收,記為A空白管。每個(gè)樣品都需要做空白管。

4. 測(cè)定孔:取1EP管,加入10μL粗酶液,170μL試劑二,10μL試劑三,10μL試劑四,混勻后置于37水浴保溫30min;立即加入35μL試劑五,混勻后置于冰浴中5min;取出后加入35μL試劑六,混勻后室溫靜置5min;室溫8000rpm離心5min;取1支新EP管,加入100μL上清液,100μL試劑七,混勻后60水浴10min,然后取出,用冷水冷卻5min,加入測(cè)定孔,于412nm測(cè)定光吸收,記為A測(cè)定管。

5. 標(biāo)準(zhǔn)孔:取1EP管,加入100μL標(biāo)準(zhǔn)品,100μL試劑七,混勻后60水浴10min,然后取出,用冷水冷卻5min,加入標(biāo)準(zhǔn)孔,于412nm測(cè)定光吸收,記為A標(biāo)準(zhǔn)管。

氨基比林-N-去甲基化酶(AND)檢測(cè)試劑盒



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