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南京億迅生物科技有限公司
主營(yíng)產(chǎn)品: 質(zhì)控樣品,人工血清,人工胃液,elisa試劑盒,化學(xué)試劑,生物試劑 |
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參考價(jià) | ¥ 1000 | ¥ 750 |
訂貨量 | 1 件 | 5 件 |
- 型號(hào)
- 品牌
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)商
- 所在地 南京市
更新時(shí)間:2019-11-07 14:05:26瀏覽次數(shù):551
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氨基比林-N-去甲基化酶(AND)檢測(cè)試劑盒
自備儀器和樣品:
可見(jiàn)分光光度計(jì)、普通離心機(jī),超速離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液槍、1mL玻璃比色皿、蒸餾水、無(wú)水乙醇和冰。
試劑組成和配制:
試劑一:粉劑×1瓶,4℃保存。臨用前加100mL蒸餾水充分溶解。
試劑二:液體×1瓶,4℃保存。
試劑三:粉劑×1瓶(棕色瓶),4℃避光保存。臨用前加入1050 μ L無(wú)水乙醇,充分溶解。
試劑四:粉劑×1瓶,4℃保存。臨用前加入510 μ L蒸餾水,充分溶解。
試劑五:粉劑×1瓶,室溫保存。臨用前加3600μ L蒸餾水,充分溶解。
試劑六:液體×1瓶,室溫保存。
試劑七:液體×1瓶,4℃保存。
標(biāo)準(zhǔn)液:液體×1瓶,-20℃保存。臨用前取1.5 mL EP 管,加入10 μ L標(biāo)準(zhǔn)液,加990 μ L蒸餾水,混勻即為50μmol/L標(biāo)準(zhǔn)甲醛溶液,4℃保存。
粗酶液提?。?/span>
1、除去細(xì)胞核,線粒體等大分子物質(zhì):稱(chēng)約0.2 g組織,加入500μL試劑一,冰上充分研磨,10 000g 4℃離心30min,取上清液轉(zhuǎn)入超速離心管。
2、粗制微粒體:4℃,100 000g,離心60min,棄上清液。
3、除血紅蛋白等雜質(zhì):向步驟2的沉淀中加500μL試劑一,蓋緊后充分震蕩溶解,100 000g離心30min,棄上清液。
4、終微粒體:向步驟3的沉淀中加試劑二200μL,蓋緊后充分震蕩溶解,即粗酶液,待測(cè)。該待測(cè)液需當(dāng)天使用。
測(cè)定:
1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30 min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到412 nm,蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑二置于37℃水浴中預(yù)熱30min以上。
3. 空白孔:取1支EP管,加入10μL粗酶液,170μL試劑二,10μL試劑三,10μL蒸餾水,混勻后置于37℃水浴保溫30min;立即加入35μL試劑五,混勻后置于冰浴中5min;取出后加入35μL試劑六,混勻后室溫靜置5min;室溫8000rpm離心5min;取新的EP管,加入100μL上清液,100μL試劑七,混勻后60℃水浴10min,然后取出,用冷水冷卻5min,于412nm測(cè)定光吸收,記為A空白管。每個(gè)樣品都需要做空白管。
4. 測(cè)定孔:取1支EP管,加入10μL粗酶液,170μL試劑二,10μL試劑三,10μL試劑四,混勻后置于37℃水浴保溫30min;立即加入35μL試劑五,混勻后置于冰浴中5min;取出后加入35μL試劑六,混勻后室溫靜置5min;室溫8000rpm離心5min;取1支新EP管,加入100μL上清液,100μL試劑七,混勻后60℃水浴10min,然后取出,用冷水冷卻5min,加入測(cè)定孔,于412nm測(cè)定光吸收,記為A測(cè)定管。
5. 標(biāo)準(zhǔn)孔:取1支EP管,加入100μL標(biāo)準(zhǔn)品,100μL試劑七,混勻后60℃水浴10min,然后取出,用冷水冷卻5min,加入標(biāo)準(zhǔn)孔,于412nm測(cè)定光吸收,記為A標(biāo)準(zhǔn)管。
氨基比林-N-去甲基化酶(AND)檢測(cè)試劑盒