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南京億迅生物科技有限公司
主營產(chǎn)品： 質(zhì)控樣品,人工血清,人工胃液,elisa試劑盒,化學(xué)試劑,生物試劑 |
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| 參考價 | ￥ 280 | ￥ 210 |
| 訂貨量 | 1 件 | 5 件 |
- 型號
- 品牌
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)商
- 所在地 南京市
更新時間：2019-11-07 14:23:10瀏覽次數(shù)：582
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Ca++Mg++——ATP酶檢測試劑盒
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計、水浴鍋、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制：
提取液：液體50mL×1 瓶，4℃保存。
試劑一：液體 10mL×1 瓶，4℃保存。
試劑二：液體 5mL×1 瓶，4℃保存。
試劑三：液體 5ml×1 瓶，4℃保存。
試劑四：粉劑×3 支，-20℃保存。用時每支加1mL蒸餾水，現(xiàn)用現(xiàn)配。用不完的試劑-20℃可保存一周。
試劑五：液體 5mL×1 瓶，4℃保存。
試劑六：粉劑×1 瓶，4℃保存。用時加入3mL雙蒸水， 4℃保存。
試劑七：粉劑×1瓶, 4℃保存。用時加入25mL雙蒸水，溶解后4℃保存一周。
試劑八：粉劑×1瓶, 4℃保存。用時加入25mL雙蒸水，溶解后4℃保存一周。
試劑九： 液體 25mL×1 瓶，室溫保存。
試劑十：10mmol/L 標(biāo)準(zhǔn)磷貯備液 10mL×1 瓶，4℃保存。
0.5μmol/mL 標(biāo)準(zhǔn)磷應(yīng)用液配制：將貯備液 20倍稀釋，即取 0.1mL試劑十加1.9mL蒸餾水充分混勻。
定磷劑的配制：按H2O: 試劑七:試劑八:試劑九=2:1:1:1 的比例配制，配好的定磷劑應(yīng)為淺黃色。若無色則試劑失效，若是藍(lán)色則為磷污染，定磷劑現(xiàn)用現(xiàn)配。
樣品酶液的制備：
1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備：
細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照每500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（功率20％，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
組織：稱取約0.1g組織，加入1mL提取液進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
2、血清（漿）樣品：直接檢測。
操作步驟
1、分光光度計預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至660nm，蒸餾水調(diào)零。
2、酶促反應(yīng)（在EP管中加入下列試劑）
| 對照管 | 測定管 |
試劑一（μL） | 130 | 90 |
試劑二（μL） | 40 | 40 |
試劑三（μL） | 40 | 40 |
試劑四（μL） | 40 | 40 |
試劑五（μL） |
| 40 |
樣品 （μL） |
| 200 |
混勻，37℃（哺乳動物）或25℃（其他物種）準(zhǔn)確水浴10min
試劑六（μL） | 50 | 50 |
樣品（μL） | 200 |
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混勻，4000g，常溫離心10min，取上清液
3定磷(在1.5mLEP管中依次加入下列試劑)
| 空白管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 | A管 | B管 |
0.5μmol/ml標(biāo)準(zhǔn)磷應(yīng)用液（μL） |
| 100 |
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上清液（μL） |
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| 100 | 100 |
蒸餾水（μL） | 100 |
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定磷試劑（μL） | 1000 | 1000 | 1000 | 1000 |
混勻，37℃水浴 30 min，冷卻至室溫，在 660nm處比色。
注意：
1、A管為對照管；B管為Na+K+-ATP酶測定管；
2、由于每一個樣都必須做對照，本試劑盒50管保證測 24份Na+K+-ATP酶。
3、此法具有微量、靈敏、快速的特點(diǎn)。所以對測定所用試管要求嚴(yán)格無磷。
4、空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只要做一管。
計算
1、血清（漿）Na+K+- ATPase活力的計算:
定義：規(guī)定每小時每毫升血清（漿）中Na+K+- ATP 酶分解ATP 產(chǎn)生1μmol無機(jī)磷的量為一個酶活力單位。
Na+K+-ATP酶活力（U/mL）= C標(biāo)準(zhǔn)管×（A測定管-A對照管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管）×V總÷V樣÷T=7.5×（A測定管-A對照管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管）
組織中Na+K+- ATPase的計算：
2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中Na+K+- ATPase活力的計算：
（1）按蛋白濃度計算：
定義：規(guī)定每小時每毫克組織蛋白中Na+K+- ATP 酶分解ATP 產(chǎn)生1μmol無機(jī)磷的量為一個酶活力單位。
Na+K+-ATP酶活力(U/mg)= C標(biāo)準(zhǔn)管×（A測定管-A對照管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管）×V總÷（Cpr×V樣）÷T =7.5×（A測定管-A對照管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管）÷Cpr
（2）按樣本鮮重計算：
定義：規(guī)定每小時每克組織中Na+K+-ATP 酶分解ATP 產(chǎn)生1μmol無機(jī)磷的量為一個酶活力單位。
Na+K+-ATP酶活力(U/g)= C標(biāo)準(zhǔn)管×（A測定管-A對照管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管）×V總÷(V樣÷V樣總×W)÷T=7.5×（A測定管-A對照管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管）÷W
（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計算：
定義：規(guī)定每小時每1萬個細(xì)菌或細(xì)胞中Na+K+-ATP 酶分解ATP 產(chǎn)生1μmol無機(jī)磷的量為一個酶活力單位。
Na+K+-ATP酶活力(U/104)= C標(biāo)準(zhǔn)管×（A測定管-A對照管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管）×V總÷(V樣÷V樣總×500)÷T=0.015×（A測定管-A對照管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管）
C標(biāo)準(zhǔn)管：標(biāo)準(zhǔn)管濃度，0.5μmol/mL；V總：酶促反應(yīng)總體積，0.5mL；V樣：加入樣本體積，0.2mL ；V樣總：加入提取液體積，1mL；T：反應(yīng)時間，1/6小時；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本鮮重，g；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500萬。
Ca++Mg++——ATP酶檢測試劑盒
