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南京億迅生物科技有限公司
主營(yíng)產(chǎn)品： 質(zhì)控樣品,人工血清,人工胃液,elisa試劑盒,化學(xué)試劑,生物試劑 |
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| 參考價(jià) | ￥ 3070 | ￥ 2300 |
| 訂貨量 | 1 件 | 5 件 |
- 型號(hào)
- 品牌
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)商
- 所在地 南京市
更新時(shí)間：2019-11-07 14:24:08瀏覽次數(shù)：587
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ADPG焦磷酸化酶(AGP)檢測(cè)試劑盒
需自備的的儀器和用品
紫外分光光度計(jì)、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水
試劑的組成和配制
提取液：液體60mL×1瓶，4℃保存;
試劑一：液體20mL×1瓶，4℃保存；
試劑二：粉劑×2支，4℃保存；臨用前每支加入250μL雙蒸水充分溶解備用；用不完的試劑仍4℃保存；
試劑三：粉劑×1瓶，4℃保存；臨用前加入3mL雙蒸水充分溶解備用；用不完的試劑仍4℃保存；
試劑四：粉劑×2瓶，4℃保存；臨用前每瓶加入3mL雙蒸水充分溶解備用；用不完的試劑仍4℃保存；
試劑五：粉劑×2瓶，-20℃保存；臨用前每瓶加入3mL雙蒸水充分溶解備用；用不完的試劑仍-20℃保存；
試劑六：粉劑×2支，-20℃保存；臨用前每支加入250μL雙蒸水充分溶解備用；用不完的試劑4℃保存；
試劑七：粉劑×2支，-20℃保存；臨用前每支加入250μL雙蒸水充分溶解備用；用不完的試劑4℃保存；
粗酶液制備
稱取約0.1g組織加入1mL提取液，冰浴中勻漿。10000g ，4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。
測(cè)定步驟
試劑名稱（μL） | 測(cè)定管 |
試劑一 | 100 |
試劑二 | 10 |
試劑三 | 50 |
試劑四 | 100 |
樣本 | 20 |
混勻，30℃保溫15 min，置沸水浴中1 min（蓋緊，防止水分散失），冰浴迅速冷卻
試劑五 | 100 |
試劑一 | 300 |
試劑六 | 10 |
試劑七 | 10 |
混勻后立即在340 nm波長(zhǎng)下記錄初始吸光度A1和 2min后的吸光度A2，計(jì)算ΔA=A2-A1。
AGP活性計(jì)算
1、按樣本蛋白濃度計(jì)算：
單位的定義：每mg組織蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘催化產(chǎn)生1nmol NADPH定義為一個(gè)酶活性單位。
AGP活性（U/mg prot）＝反應(yīng)總體積（700μL ）÷樣本體積（20μL ）÷反應(yīng)時(shí)間(2min)÷NADPH消光系數(shù)（6.22×10-3）×ΔA÷蛋白質(zhì)濃度（mg/mL）=2813×ΔA÷蛋白質(zhì)濃度（mg/mL）。
此法需要自行測(cè)定粗酶液蛋白質(zhì)濃度。
2、按照樣本鮮重計(jì)算
單位的定義：每g組織在反應(yīng)體系中每分鐘催化產(chǎn)生1nmol NADPH定義為一個(gè)酶活力單位。
AGP活性（U/g 鮮重）=反應(yīng)總體積（700μL ）÷樣本體積（20μL ）÷反應(yīng)時(shí)間(2min)÷NADPH消光系數(shù)（6.22×10-3）×ΔA ÷樣本鮮重(g/mL) =2813×ΔA÷樣本鮮重(g/mL)
ADPG焦磷酸化酶(AGP)檢測(cè)試劑盒
