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南京億迅生物科技有限公司
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| 參考價 | ￥ 215 | ￥ 160 |
| 訂貨量 | 1 件 | 5 件 |
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更新時間：2019-11-07 14:24:58瀏覽次數(shù)：629
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6-磷酸葡萄糖脫氫酶(G6PDH)檢測試劑盒
測定原理：
G6PDH催化NADP+還原生成NADPH，在340 nm下測定NADPH增加速率。
需自備的儀器和用品：
紫外分光光度計、水浴鍋、臺式離心機、可調(diào)式移液器、1 mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制：
提取液：液體60mL×1瓶，4℃保存；
試劑一：液體50 mL×1瓶，4℃保存；
試劑二：粉劑×1，-20℃保存；用時每支加275μL雙蒸水充分溶解備用；
試劑三：粉劑×1，-20℃保存；用時每只加275μL雙蒸水充分溶解備用。
樣本的前處理：
1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備 ：
細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，棄上清，按照每200萬細(xì)菌或細(xì)胞加入400μL提取液，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（功率20％，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
組織：稱取約0.1g組織，加入1mL提取液進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
2、血清（漿）樣品：直接檢測。
G6PDH測定操作表：
試劑名稱（μL） | 測定管 |
試劑一 | 750 |
試劑二 | 10 |
試劑三 | 10 |
樣本 | 30 |
測定前將試劑一置于37℃(哺乳動物)或25℃（其它物種）水浴中預(yù)熱10min左右，將上述試劑按順序加入1 mL石英比色皿中，加樣本的同時開始計時；混勻，在34 0 nm波長下記錄1min時的初始吸光度A1，迅速將比色皿連同反應(yīng)液一起放入37℃(哺乳動物)或25℃（其它物種）水浴中，準(zhǔn)確反應(yīng)5min；迅速取出比色皿并擦干，記錄6min時的吸光度A2，計算ΔA=A2-A1。
注意事項：
1、若A2-A1大于0.5，需將酶液用提取液稀釋，使A2-A1小于0.5，可提高檢測靈敏度。
2、實驗時，試劑二、試劑三和樣本在冰上放置，以免變性和失活。試劑一37℃或25℃水浴放置。
3、比色皿中反應(yīng)液的溫度必須保持37℃或25℃，取小燒杯一只裝入一定量的37℃或25℃蒸餾水，將此燒杯放入37℃或25℃水浴鍋中。在反應(yīng)過程中把比色皿連同反應(yīng)液放在此燒杯中。
4、兩個人同時做此實驗，一個人比色，一個人計時，以保證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。
G6PDH活力單位的計算：
1、血清（漿）G6PDH活力的計算:
單位的定義：每升血清（漿）在反應(yīng)體系中每分鐘生成1 μmol的NADPH定義為一個酶活力單位。
G6PDH（U/L）＝反應(yīng)總體積（800μL）÷樣本體積（30μL）÷反應(yīng)時間(5min)÷NADPH消光系數(shù)（6.22×10-3）×ΔA =857×ΔA
2、組織中G6PDH活力的計算:
（1）按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每mg組織蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘生成1 nmol NADPH定義為一個酶活力單位。
G6PDH（U/mg prot）＝反應(yīng)總體積（800μL）÷樣本體積（30μL）÷反應(yīng)時間(5min)÷NADPH消光系數(shù)（6.22×10-3）×ΔA ÷蛋白質(zhì)濃度（mg/mL）=857×ΔA÷蛋白質(zhì)濃度（mg/mL）
（2）按樣本鮮重計算：
單位的定義：每mg組織蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘生成1 nmol NADPH定義為一個酶活力單位。
G6PDH（U/g 鮮重）＝反應(yīng)總體積（800μL）÷樣本體積（30μL）÷反應(yīng)時間(5min)÷NADPH消光系數(shù)（6.22×10-3）×ΔA÷樣品鮮重（g/mL）=857×ΔA÷樣品鮮重（g/mL）
3、細(xì)菌或細(xì)胞中G6PDH活力的計算:
（1）按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每mg組織蛋白在反應(yīng)體系中每分鐘生成1 nmol NADPH定義為一個酶活力單位。
G6PDH（U/mg prot）＝反應(yīng)總體積（800μL）÷樣本體積（30μL）÷反應(yīng)時間(5min)÷NADPH消光系數(shù)（6.22×10-3）×ΔA ÷蛋白質(zhì)濃度（mg/mL）=857×ΔA÷蛋白質(zhì)濃度（mg/mL）
（2）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計算：
單位的定義：每1萬個細(xì)菌或細(xì)胞在反應(yīng)體系中每分鐘生成1 nmol NADPH定義為一個酶活力單位。
G6PDH（U/104 cell）＝反應(yīng)總體積（800μL）÷樣本體積（30μL）÷反應(yīng)時間(5min)÷NADPH消光系數(shù)（6.22×10-3）×ΔA ÷細(xì)菌或細(xì)胞密度（104個/mL）=857×ΔA÷細(xì)菌或細(xì)胞密度（104個/mL）
6-磷酸葡萄糖脫氫酶(G6PDH)檢測試劑盒
