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分析LST培養(yǎng)基滅菌失敗的原因
2020-12-5 閱讀(1618)
分析LST培養(yǎng)基滅菌失敗的原因
大腸菌群（大腸桿菌）檢測實驗培養(yǎng)基（LST）滅菌時，偶爾會有小氣泡留在小導(dǎo)管內(nèi)，導(dǎo)致培養(yǎng)基不能使用。重復(fù)滅菌不僅費時費電，還會破壞培養(yǎng)基的成分。為了避免問題的發(fā)生，根據(jù)實驗經(jīng)驗和嚴密思考做出幾種原因分析，并給予解決的辦法。
原因一：試管塞塞得太緊
試管塞塞得太緊在滅菌時會導(dǎo)致試管內(nèi)與滅菌鍋內(nèi)壓力不一致。在滅菌鍋升溫升壓時，鍋內(nèi)壓力會大于管內(nèi)壓力；滅菌鍋降溫降壓時，鍋內(nèi)壓力小于管內(nèi)壓力。鍋內(nèi)壓力大于管內(nèi)壓力時，試管內(nèi)壓力不夠，不能將小導(dǎo)管內(nèi)氣體排盡，就留有氣泡；鍋內(nèi)壓力小于管內(nèi)壓力時，可能會使試管塞和培養(yǎng)基崩出，培養(yǎng)基報廢。
解決辦法：改用透氣性好的棉花塞，切勿使用橡皮塞。
原因二：滅菌鍋壓力不夠氣體不能排盡
滅菌鍋zui大壓力不夠不能使管內(nèi)液體強行把氣體擠出，zui后還留有小氣泡，還會使溫度上升緩慢，或達不到滅菌溫度。此原因的可能性較小，我們可以在排除原因一、二、三、四的情況下，用不加試管塞、大口導(dǎo)管做試驗，若還仍不能達到效果，就要檢查滅菌鍋了。
解決辦法：修理滅菌鍋。
注意事項：1.小導(dǎo)管內(nèi)出現(xiàn)氣泡通常是由前3種原因引起的，實際操作中可以按以上順序進行排查。2.千萬不要將試管倒置，以免試管口和試管塞受培養(yǎng)基污染。
原因三：小導(dǎo)管口太小
我們可以把一根毛細管一端封口，另一端插進水里，毛細管里怎么都不會進水。同樣把一個燒杯倒扣進水里就很容易進水了。小導(dǎo)管在加壓后一方面水要進去，另外里面的空氣要出來，如果口太小的話，空氣不容易出去，水也不容易進來，就會導(dǎo)致氣泡留在里面了。
解決辦法：改用內(nèi)空較大的導(dǎo)管，盡量使用V型管，不要使用錐型管。
原因四：培養(yǎng)基質(zhì)量引起
由培養(yǎng)基質(zhì)量引起氣體不能排盡或培養(yǎng)基含有高溫高壓分解產(chǎn)氣的成分。滅菌時用水做培養(yǎng)基組的對照試驗，若培養(yǎng)基組有氣泡，而對照組沒有氣泡，可確定是由此原因引起。
解決辦法：改用其它培養(yǎng)基。
原因五：過早打開滅菌鍋
當(dāng)滅菌鍋壓力表示數(shù)為0而溫度表示數(shù)還高于室溫時，不要打開滅菌鍋。因為打開鍋蓋瞬間，鍋內(nèi)大量熱量散出，溫度突然降低，試管內(nèi)溫度也隨著降低，導(dǎo)致管內(nèi)氣壓減小，沸點降低，部分水會汽化留在小導(dǎo)管內(nèi)。
解決辦法：等滅菌鍋內(nèi)氣壓和溫度都降到與室溫一致或相差不大時再打開滅菌鍋。
