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細胞計數(shù)液操作小竅門
2020-9-1 閱讀(1312)
細胞計數(shù)液操作小竅門
細胞計數(shù)在細胞培養(yǎng)工作中，常需要了解細胞生活狀態(tài)和鑒別細胞死活，確定細胞接種濃度和數(shù)量以及了解細胞存活率和增殖度，如用酶消化制備的細胞懸液中細胞活力的鑒別，凍存細胞復蘇后的活力檢測等。細胞懸液制備后，常用活體染料臺盼藍對細胞進行染色，進行細胞計數(shù)。臺盼藍不能透過活細胞正常完整的細胞膜，故活細胞不著色。而死亡細胞的細胞膜通透性增高，可使染料進入細胞內(nèi)而使細胞著色（藍色）。
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紅細胞計數(shù)液
白細胞計數(shù)液
血小板計數(shù)液
嗜酸性粒細胞計數(shù)液
細胞計數(shù)一般用血細胞計數(shù)板，按白細胞計數(shù)方法進行計數(shù)，便于確定細胞的生活狀況。所需物品 0.4％臺盼藍溶液 無水乙醇或95％乙醇溶液 脫脂棉 相差顯微鏡 試管、吸管、毛細吸管 細胞計數(shù)板細胞計數(shù)方法
操作小貼士；
1. 將動物細胞用PBS制備成適當濃度的細胞懸液備用。
2. 用無水乙醇或95％乙醇溶液擦拭計數(shù)板后，用綢布擦凈，另擦凈蓋玻片一張，把蓋片覆在計數(shù)板上面。
3. 用滴管吸取0.4％臺盼藍染液，按1∶1比例加入細胞懸液中。從計數(shù)板邊緣緩緩滴入，使之充滿計數(shù)板和蓋片之間的空隙中。注意不要使液體流到旁邊的凹槽中或帶有氣泡，否則要重做。稍候片刻，將計數(shù)板放在低倍鏡下（10×10倍）觀察計數(shù)。
4. 按圖計算計數(shù)板的四角大方格（每個大方格又分16個小方格）內(nèi)的細胞數(shù)。計數(shù)時，只計數(shù)完整的細胞，若聚成一團的細胞則按一個細胞進行計數(shù)。在一個大方格中，如果有細胞位于線上，一般計下線細胞不計上線細胞，計左線細胞不計右線細胞。二次重復計數(shù)誤差不應超過±5％。鏡下觀察，凡折光性強而不著色者為活細胞，染上藍色者為死細胞。
5. 計完數(shù)后，需換算出每ml懸液中的細胞數(shù)。由于計數(shù)板中每一方格的面積為0.01cm2，高為0.01cm，這樣它的體積為0.0001 cm3，即0.1 mm3。由于1ml＝1000 mm3，所以每一大方格內(nèi)細胞數(shù)×10,000＝細胞數(shù)/ml，故可按下式計算：細胞懸液細胞數(shù)/ml＝4個大格細胞總數(shù)/4×10,0006. 如計數(shù)前已稀釋，可再乘稀釋倍數(shù)。
6. 計數(shù)細胞后，計算細胞懸液濃度并求出存活與死亡細胞數(shù)的比例。
注意事項1. 向計數(shù)板中滴細胞懸液時要干凈利落，加量要適當，過多易使蓋片漂移，或淹過蓋片則失敗，需重做；過少易出現(xiàn)氣泡；不理想時，應重做；2. 鏡下計數(shù)時，若方格中細胞分布明顯不均，說明細胞懸液混合不均勻，需重新將細胞懸液進行混合，再重新計數(shù)。3. 計數(shù)時，對于位于邊線或交界處的細胞/細胞團，遵循“計上不計下，計左不計右”的規(guī)則；4. 一個細胞團計做一個細胞。
細胞計數(shù)液操作小竅門
