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羊偽狂犬病毒IgG抗體ELISA檢測(cè)試劑盒原來可以可以操作

【產(chǎn)品簡(jiǎn)介】
        羊偽狂犬?。≒R）是一種高度接觸性、急性傳染病，給國(guó)內(nèi)養(yǎng)豬業(yè)造成巨大的損失。在豬偽狂犬的免疫預(yù)防工作中，接種了豬偽狂犬疫苗后，由于多種因素可能導(dǎo)致豬不產(chǎn)生或產(chǎn)生低水平豬偽狂犬病毒抗體。
        gb蛋白是PRV結(jié)構(gòu)蛋白，是PRV的主要保護(hù)性抗原蛋白，可誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生保護(hù)性抗體。本試劑盒采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)豬血清中抗PRV gD蛋白抗體IgG。用于免疫偽狂犬疫苗后的抗體動(dòng)態(tài)水平監(jiān)測(cè)，指導(dǎo)免疫預(yù)防工作，評(píng)估偽狂犬免疫狀況，也可用于豬偽狂犬的流行病學(xué)調(diào)查。

【用法與判定】 按以下步驟進(jìn)行：
1、需要自備的器材
1.1 微量移液器；
1.2 微量移液器配套使用的槍頭；
1.3 用來稀釋洗滌液的500 ml量筒；
1.4 適用于檢測(cè)96T微孔板的酶標(biāo)儀；
1.5 用于稀釋樣品的1.5 ml Ep管；
1.6 蒸餾水或去離子水。
2、樣品的制備  
用樣品稀釋液將待檢血清樣品進(jìn)行100倍稀釋(建議：2μl血清樣品加入198μl樣品稀釋液中)，樣品加入包被板前要充分混勻，稀釋不同待檢樣品注意更換槍頭。
注意：①制備血清用的血液樣本應(yīng)無溶血現(xiàn)象發(fā)生；②不能稀釋陰性、陽性對(duì)照。
3、操作步驟 （﹡使用前應(yīng)輕輕旋轉(zhuǎn)或震蕩予以混勻，所有試劑應(yīng)平衡至室溫）
3.1  在A1和A2孔中分別加入100μl陰性對(duì)照；
3.2  在A3和A4孔中分別加入100μl陽性對(duì)照；
3.3  取100μl經(jīng)1:100稀釋好的待檢樣品加入相應(yīng)孔中，并做好記錄；
3.4  37℃孵育30min；
3.5  將各孔的液體棄入廢液桶，每孔加250μl的洗滌液（試劑盒內(nèi)20×濃縮洗滌液需用蒸餾水或去離子水稀釋后方可使用。如有結(jié)晶，需先溶解后，方可進(jìn)行稀釋）進(jìn)行洗板，重復(fù)5次，每次30s；
﹡加液時(shí)防止各孔間洗滌液串流影響檢測(cè)結(jié)果，盡量將孔內(nèi)洗滌液拋甩干凈；
3.6  每孔加100μl酶標(biāo)結(jié)合物；
3.7  37℃孵育30min；重復(fù)步驟3.5；
3.9  每孔加100μl底物液；
3.9  37℃孵育10min（避光顯色）；
3.10 每孔加100μl的終止液；
3.11 立刻于450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的吸光度值，即OD450值。
4、試驗(yàn)有效性判斷
4.1陰性對(duì)照：正常情況下，陰性對(duì)照OD450值≤0.2；
4.2陽性對(duì)照：正常情況下，陽性對(duì)照OD450值≥0.4；
4.3臨界值(C.O.)的計(jì)算：臨界值=0.18+陰性對(duì)照均值；陰性對(duì)照OD450值大于0.2時(shí)應(yīng)舍棄，如所有陰性對(duì)照OD450值都大于0.2時(shí)須重復(fù)實(shí)驗(yàn)；陰性對(duì)照于0.05時(shí)以0.05計(jì)算。
4.4結(jié)果判定：檢測(cè)樣品OD450值≥臨界值，判定該檢測(cè)樣品為陽性；檢測(cè)樣品OD450值＜臨界值，判定該檢測(cè)樣品為陰性。
【注意事項(xiàng)】
（1）待檢血清樣品數(shù)量過多時(shí)，應(yīng)先使用血清稀釋板將所有待檢血清稀釋完畢后，再統(tǒng)一將血清樣品加入酶標(biāo)板中，使反應(yīng)時(shí)間一致。
（2）試劑盒使用的過程中不要吸煙、喝水和吃東西。
（3）底物液和終止液對(duì)皮膚有刺激性，注意防護(hù)。
（4）底物液不要暴露于強(qiáng)光和任何氧化劑；使用潔凈的玻璃和朔料容器處理底物液。
（5）所有試劑應(yīng)在2～8℃存放；使用前恢復(fù)到室溫，使用后放回2～8℃。
（6）注意防止試劑盒組分受到污染。
（7）不要使用超過有效期的試劑，不同批次試劑盒的組分不要混用。
（8）操作過程中的移液、時(shí)間和洗滌必須精確。