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Taq DNA連接酶應(yīng)用范圍
2023-5-18 閱讀(436)
Taq DNA連接酶應(yīng)用范圍
Taq DNA 連接酶是一種熱穩(wěn)定性連接酶，能夠催化磷酸二酯鍵的形成，使與同一互補(bǔ)靶 DNA 鏈雜交的兩條相鄰寡核苷酸鏈的 5′-磷酸末端和 3′-羥基末端通過(guò)磷酸二酯鍵相連。Taq DNA 連接酶催化的連接反應(yīng)只有當(dāng)兩條寡核苷酸鏈與互補(bǔ)靶 DNA 完全配對(duì)，并且兩條寡核苷酸鏈之間沒(méi)有空隙的條件下才可發(fā)生。因此，可以用它來(lái)檢測(cè)單堿基替換。在 45℃-65℃ 范圍內(nèi)，Taq DNA 連接酶均有活性。
應(yīng)用
雙鏈DNA切刻的修復(fù)
用于Gibson組裝方法的建立
活性定義
1 單位指 50μl 反應(yīng)體系中，45℃ 條件下，15 分鐘內(nèi)能使 50% 的1μg 經(jīng) BstEII 消化的 λDNA 片段（12 bp 粘性末端）發(fā)生連接所需要的酶量。
儲(chǔ)存
-20℃可保存半年，長(zhǎng)期儲(chǔ)存請(qǐng)置于 -70℃。
1× Taq DNA 連接酶反應(yīng)緩沖液
20 mM Tris-HCl（pH 7.6），25 mM KAc，10 mM Mg(Ac)2，10 mM DTT，1 mM NAD 和 0.1% Triton X-100，45℃ 溫育。 該酶需 NAD+ 作輔因子，在 10× Taq DNA 連接酶緩沖液中已添加 NAD+；為了延長(zhǎng) NAD+ 的半衰期，緩沖液應(yīng)于 -70℃ 貯存。
合成酶，能催化兩個(gè)分子連接成一個(gè)分子或把一個(gè)分子的尾相連接的酶。此反應(yīng)與ATP的分解反應(yīng)相偶聯(lián)。在把兩分子相連接的同時(shí)發(fā)生三磷酸腺苷（ATP)的高能磷酸鍵的斷裂如DNA連接酶等。
連接酶是酶分類中重要的一類(EC 6):6.1形成C-O鍵；6.2形成C-S鍵；6.3形成C-N鍵；6.4 形成C-C鍵。
連接酶的催化反應(yīng)過(guò)程需要Mg離子
