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丹磺酰氯如何正確操作
2022-6-9 閱讀(2162)
丹磺酰氯如何正確操作
丹磺酰氯是一種與脂肪胺和芳香胺中的伯氨基反應(yīng)生成穩(wěn)定的藍(lán)色或藍(lán)綠色熒光磺酰胺加合物的試劑。可用于測(cè)定肽鏈的氨基末端，它能專一地與鏈N-端α-氨基反應(yīng)生成丹磺酰-肽，后者水解生成的丹磺酰-氨基酸具有很強(qiáng)的熒光，可直接用電泳法或?qū)游龇ㄨb定出N-端是何種氨基酸。用于氨基酸和肽的N末端衍生以及通過反相HPLC和其他分析方法檢測(cè)多胺等。丹磺酰氯也廣泛用于修飾氨基酸; 特別是蛋白質(zhì)測(cè)序和氨基酸分析。 它也可以用來標(biāo)記羥基和羧酸官能團(tuán)。
產(chǎn)品參數(shù)
別名： 丹酰氯，二甲氨基萘磺酰氯，Dansyl Chloride ，DNSCl，5-(Dimethylamino)-1-naphthalenesulfonyl chloride，
性狀： 橙黃色粉末
CAS號(hào)： 605-65-2
分子式： C12H12CINO2S
分子量： 269.74
純度： ＞98%
溶解性： 溶于丙酮
用途及描述：科研試劑，廣泛應(yīng)用于分子生物學(xué)，藥理學(xué)等科研方面，嚴(yán)禁用于人體。用于熒光N端衍生氨基酸和肽的熒光試劑，并通過反相HPLC檢測(cè)。丹酰氯（DNSC）是一種伯胺反應(yīng)劑，廣泛用作熒光試劑，用于氨基酸和肽的N末端衍生以及通過反相HPLC和其他分析方法檢測(cè)多胺等。
實(shí)驗(yàn)步驟
1. 標(biāo)準(zhǔn)氨基酸的丹磺?；?/p>
分別稱取2 . 3μmol 層析純的氨基酸, 溶于0 . 5 ml 0 . 2 mol/ L碳酸-氫鈉溶液中。取0 . 1 ml 于有塞玻璃試管中, 加入0.1 ml DNS-Cl 丙酮溶液, 檢查pH, 必要時(shí)用三乙胺調(diào)pH9 . 0～ 9 . 5 ,于室溫(25 ℃ 左右) 下放置2～ 4 h。再用無離子水稀釋10 倍,貯存于暗處。經(jīng)層析, 得DNS-氨基酸的標(biāo)準(zhǔn)圖譜。
2. 蛋白質(zhì)N-末端氨基酸的DNS 化
取0 . 5 mg 蛋白質(zhì)樣品, 置于有塞玻璃管中。用少量水溶解后, 加入0 . 5 ml 0 . 2 mol/ L 碳酸-氫鈉溶液。再加入0 .5 mlDNS-Cl丙酮溶液, 用三乙胺調(diào)至pH9 . 0～9 . 5 , 塞好塞子, 于40 ℃ 烘箱中反應(yīng)2 h , 或室溫(25 ℃左右)放置2～4 h , 生成DNS-蛋白質(zhì)。
3. DNS-蛋白質(zhì)的水解
DNS 化反應(yīng)結(jié)束后, 真空蒸去丙酮, 加入0 . 5 ml 6 mol/ L 鹽酸溶解DNS-蛋白質(zhì)。全部移入水解管, 抽真空封管, 于111 ℃烘箱中水解18～24 h。開管后蒸去鹽酸, 加少量水, 再蒸干。重復(fù)2～3 次以除盡鹽酸。
4. DNS-氨基酸的抽提
將上述水解產(chǎn)物, 加0 . 5 ml 水, 用1 mol/ L 鹽酸調(diào)至pH2～3。加入0 . 5 ml 乙酸乙酯抽提, 分層可在細(xì)長滴管中進(jìn)行。重復(fù)抽提2～3 次, 將上層抽提液合并于小試管中, 抽去乙酸乙酯,置于干燥器中備用。
5. DNS-氨基酸的層析與檢測(cè)
生成的DNS-氨基酸和標(biāo)準(zhǔn)DNS-氨基酸分別進(jìn)行聚酰胺薄膜層析。
