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DNS試劑(GB 20287)參考國家標準GB 20287-2006
2022-4-21 閱讀(1491)
DNS試劑(GB 20287)參考國家標準GB 20287-2006
植物體內(nèi)的碳素營養(yǎng)狀況以及農(nóng)產(chǎn)品的品質(zhì)形狀,常以糖含量作為重要指標。單糖和某些寡糖(如麥芽糖)含有游離的醛基或酮基,具有還原性,屬于還原糖;多糖和蔗糖等屬于非還原糖。可以利用多糖能被酸水解為單糖的特性通過測定水解后的單糖含量對總糖進行測定。
檢測原理是用羧甲基纖維素鈉鹽(CMC)為底物，經(jīng)纖維素酶水解后生成還原糖，后者能與反應，其中硝基還原成氨基，使溶液變?yōu)槌壬?，橙色的深度與還原糖的濃度成正比。因此可用比色法求得還原糖的含量，進而求出纖維素酶活的大小。
稱取3，5-二硝基水楊酸3.15 g(化學純)，加水500 mL。，攪拌5 s，水浴至45 ℃。然后逐步加入100 mL 0.2g/ mL的氫氧化鈉溶液，同時不斷攪拌。直到溶液清澈透明(注意：在加入氫氧化鈉過程中，溶液溫度不要超過48℃)。再逐步加入四水酒石酸鉀鈉91.0 g、苯2.50 g和無水亞硫酸鈉2.50 g。繼續(xù)45 ℃水浴加熱，同時補加水300 mL，不斷攪拌，直到加入的物質(zhì)*溶解。停止加熱，冷卻至室溫后，用水定容至1000 mL。用燒結(jié)玻璃過濾器過濾。取濾液，儲存在棕色瓶中，避光保存。室溫下存放7 d后可以使用，有效期為12個月。
制作標準曲線 取9支大試管，分別按表一順序加入各種試劑。 表一 將上述各管溶液混后，在紫外可見分光光度計上用綠色濾光片(520nm) 進行比色測定，用空白管溶液調(diào)零，記錄光密度值。以光密度值為橫坐標，以葡萄糖濃度為縱坐標，繪制標準曲線。
DNS試劑用途：
1.在生化試驗中，DNS常用于還原糖含量的測定。
2.也可用于生物質(zhì)中半纖維素含量的測定。它們均要與標準葡萄糖曲線進行比對。
