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上海宇淳生物科技有限公司

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β-木糖苷酶試劑盒
β-木糖苷酶試劑盒
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更新時間:2024-06-19 10:45:01瀏覽次數(shù):308

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【簡單介紹】
級別 其他
β-木糖苷酶試劑盒
β-木糖苷酶(EC3.2.1.37)是一類重要的木聚糖降解水解酶,存在于植物、細菌和真菌等 生物體

β-木糖苷酶試劑盒

β-木糖苷酶試劑盒

本試劑盒僅供科研使用 1 β-木糖苷酶(β- xylosidase)活性測定試劑盒說明書 (貨號:WS2170F 分光法 24 樣) 一、產(chǎn)品簡介 : β-木糖苷酶(EC3.2.1.37)是一類重要的木聚糖降解水解酶,存在于植物、細菌和真菌等 生物體,主要從非還原末端把木二糖和低聚木糖催化切割為木糖單體,產(chǎn)物木糖可作為 碳源應(yīng)用于微生物發(fā)酵。另外,β-木糖苷酶還可以作為生物漂白劑應(yīng)用于造紙工業(yè),比 傳統(tǒng)的漂白法環(huán)保,具有廣泛的應(yīng)用價值。 β-木糖苷酶催化對硝基*酚-β-D-木糖苷產(chǎn)生對硝基*酚(PNP),該產(chǎn)物在 405nm 有特征吸收峰,通過測定 405nm 光吸收增加速率,即可計算β-木糖苷酶活性。 二、試劑盒的組成和配制: 試劑名稱 規(guī)格 保存要求 備注 提取液 液體 30mL×1 4℃保存 試劑一 粉劑 mg×1 4℃保存 用前甩幾下使試劑落入底部, 再加 2mL 蒸餾水溶解備用。 試劑二 液體 6mL×1 4℃保存 試劑三 27mL×1 4℃保存 標(biāo)準品 粉劑×1 4℃保存 若重新做標(biāo)曲,則用到該試劑。 三、所需的儀器和用品: 可見分光光度計、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、可調(diào)式移液器、低溫離心機、天平、 研缽、冰和蒸餾水。 四、β-木糖苷酶活性測定: 建議正式實驗前選取 2 個樣本做預(yù)測定,了解本批樣品情況,熟悉實驗流程,避免實驗 樣本和試劑浪費! 1、樣本的制備: ① 組織樣本:取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.5g),加入 1mL 提取液,進行冰 浴勻漿。12000rpm,4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。 【注】若增加樣本量,可按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)1:5~10 比例提取。 ② 細菌或細胞:先收集細菌或細胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;取約 500 萬細菌或細 胞,加入 1mL 提取液,超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率 20%或 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次);12000rpm,4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。 【注】若增加樣本量,可按照細菌或細胞數(shù)量(104 ):提取液體積(mL)500~1000:1 的比例提取。 ③ 液體樣本:直接檢測。若渾濁,離心后取上清檢測。 2、上機檢測: ① 可見分光光度計預(yù)熱 30min,調(diào)節(jié)波長至 405nm,蒸餾水調(diào)零。 ② 在 EP 管中依次加入: 試劑名稱(μL測定管 對照管 樣本 60 60 試劑一 75 蒸餾水 75 試劑二 105 105 迅速混勻,45℃保溫 20min 試劑三 540 540 混勻, 取全部澄清液體轉(zhuǎn)移至 1mL 玻璃比色皿中,于 405nm 處測定吸光值 A,ΔA=A 測定-A 對照(每個測定本試劑盒僅供科研使用 2 管需設(shè)一個對照管)。 【注】:若ΔA 低于 0.01,可增加樣本取樣量 V1(如增至 120μL,則試劑三相應(yīng)減 少),或延長保溫時間(如:40min 或更長),或增加樣本質(zhì)量 W,則改變后 V1 T W 需代入計算公式重新計算。 五、結(jié)果計算: 1、標(biāo)準曲線方程:y=0.0211x-0.0004;x 為標(biāo)準品摩爾質(zhì)量(nmol),y ΔA。 2、按蛋白濃度計算: 定義:45℃下,每毫克蛋白每分鐘催化產(chǎn)生 1 nmol 對硝基*酚(PNP)為一個酶活單位。 β-木糖苷酶活性(nmol/min/mg prot)=(ΔA+0.0004)÷0.0211÷(V1×Cpr)÷T =39.5×(ΔA+0.0004)÷ Cpr 3、按樣本質(zhì)量計算: 定義:45℃下,每克組織每分鐘催化產(chǎn)生 1 nmol 對硝基*酚(PNP)為一個酶活單位。 β-木糖苷酶活性(nmol/min/g 鮮重)=(ΔA+0.0004)÷0.0211÷(V1÷V×W)÷T =39.5×(ΔA+0.0004)÷W 4、按細胞數(shù)量計算: 定義:45℃下,每 104個細胞每分鐘催化產(chǎn)生 1 nmol 對硝基*酚(PNP)為一酶活單位。 β-木糖苷酶活性(nmol/min/104cell)=(ΔA+0.0004)÷0.0211÷(V1÷V×細胞數(shù)量)÷T =39.5×(ΔA+0.0004)÷細胞數(shù)量 5、按液體體積計算: 定義:45℃下,每毫升液體每分鐘催化產(chǎn)生 1 nmol 對硝基*酚(PNP)為一個酶活單位。 β-木糖苷酶活性(nmol/min/mL)=(ΔA+0.0004)÷0.0211÷V1÷T =39.5×(ΔA+0.0004) V---加入提取液體積,1mL; V1---加入反應(yīng)體系中樣本體積,60μL=0.06mL; W---樣本質(zhì)量,g; 500---細胞或細菌總數(shù),500 萬; T---反應(yīng)時間,20minPNP 對分子質(zhì)量---139.11。 Cpr---樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL,建議使用本公司的 BCA 蛋白含量檢測試劑盒; 附:標(biāo)準曲線制作過程: 1 制備標(biāo)準品母液(1mg/mL):向標(biāo)準品 EP 管里面加入 1ml 蒸餾水。 2 把母液稀釋成以下濃度梯度的標(biāo)準品:0, 0.05, 0.1, 0.15, 0.2, 0.25 mg/mL。也可根據(jù) 實際樣本來調(diào)整標(biāo)準品濃度。 3 EP 管加入:60μL 標(biāo)準品+75μL 蒸餾水+105μL 試劑二+540μL 試劑三,混勻,取 全部澄清液體轉(zhuǎn)移至 1mL 玻璃比色皿中,于 405nm 下讀取吸光值。 4 根據(jù)結(jié)果制作標(biāo)準曲線。



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