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上海宇淳生物科技有限公司

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β-木糖苷酶試劑盒
β-木糖苷酶試劑盒
參考價(jià)880
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【簡(jiǎn)單介紹】
級(jí)別 其他
β-木糖苷酶試劑盒
β-木糖苷酶(EC3.2.1.37)是一類重要的木聚糖降解水解酶,存在于植物、細(xì)菌和真菌等 生物體

β-木糖苷酶試劑盒

β-木糖苷酶試劑盒

本試劑盒僅供科研使用 1 β-木糖苷酶(β- xylosidase)活性測(cè)定試劑盒說明書 (貨號(hào):WS2170F 分光法 24 樣) 一、產(chǎn)品簡(jiǎn)介 : β-木糖苷酶(EC3.2.1.37)是一類重要的木聚糖降解水解酶,存在于植物、細(xì)菌和真菌等 生物體,主要從非還原末端把木二糖和低聚木糖催化切割為木糖單體,產(chǎn)物木糖可作為 碳源應(yīng)用于微生物發(fā)酵。另外,β-木糖苷酶還可以作為生物漂白劑應(yīng)用于造紙工業(yè),比 傳統(tǒng)的漂白法環(huán)保,具有廣泛的應(yīng)用價(jià)值。 β-木糖苷酶催化對(duì)硝基*酚-β-D-木糖苷產(chǎn)生對(duì)硝基*酚(PNP),該產(chǎn)物在 405nm 有特征吸收峰,通過測(cè)定 405nm 光吸收增加速率,即可計(jì)算β-木糖苷酶活性。 二、試劑盒的組成和配制: 試劑名稱 規(guī)格 保存要求 備注 提取液 液體 30mL×1 4℃保存 試劑一 粉劑 mg×1 4℃保存 用前甩幾下使試劑落入底部, 再加 2mL 蒸餾水溶解備用。 試劑二 液體 6mL×1 4℃保存 試劑三 27mL×1 4℃保存 標(biāo)準(zhǔn)品 粉劑×1 4℃保存 若重新做標(biāo)曲,則用到該試劑。 三、所需的儀器和用品: 可見分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、可調(diào)式移液器、低溫離心機(jī)、天平、 研缽、冰和蒸餾水。 四、β-木糖苷酶活性測(cè)定: 建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定,了解本批樣品情況,熟悉實(shí)驗(yàn)流程,避免實(shí)驗(yàn) 樣本和試劑浪費(fèi)! 1、樣本的制備: ① 組織樣本:取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.5g),加入 1mL 提取液,進(jìn)行冰 浴勻漿。12000rpm4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。 【注】若增加樣本量,可按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)1:5~10 比例提取。 ② 細(xì)菌或細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;取約 500 萬細(xì)菌或細(xì) 胞,加入 1mL 提取液,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率 20%或 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次);12000rpm,4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。 【注】若增加樣本量,可按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104 個(gè)):提取液體積(mL)500~1000:1 的比例提取。 ③ 液體樣本:直接檢測(cè)。若渾濁,離心后取上清檢測(cè)。 2、上機(jī)檢測(cè): ① 可見分光光度計(jì)預(yù)熱 30min,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 405nm,蒸餾水調(diào)零。 ② 在 EP 管中依次加入: 試劑名稱(μL測(cè)定管 對(duì)照管 樣本 60 60 試劑一 75 蒸餾水 75 試劑二 105 105 迅速混勻,45℃保溫 20min 試劑三 540 540 混勻, 取全部澄清液體轉(zhuǎn)移至 1mL 玻璃比色皿中,于 405nm 處測(cè)定吸光值 A,ΔA=A 測(cè)定-A 對(duì)照(每個(gè)測(cè)定本試劑盒僅供科研使用 2 管需設(shè)一個(gè)對(duì)照管)。 【注】:若ΔA 低于 0.01,可增加樣本取樣量 V1(如增至 120μL,則試劑三相應(yīng)減 少),或延長(zhǎng)保溫時(shí)間(如:40min 或更長(zhǎng)),或增加樣本質(zhì)量 W,則改變后 V1 T W 需代入計(jì)算公式重新計(jì)算。 五、結(jié)果計(jì)算: 1、標(biāo)準(zhǔn)曲線方程:y=0.0211x-0.0004;x 為標(biāo)準(zhǔn)品摩爾質(zhì)量(nmol),y ΔA。 2、按蛋白濃度計(jì)算: 定義:45℃下,每毫克蛋白每分鐘催化產(chǎn)生 1 nmol 對(duì)硝基*酚(PNP)為一個(gè)酶活單位。 β-木糖苷酶活性(nmol/min/mg prot)=(ΔA+0.0004)÷0.0211÷(V1×Cpr)÷T =39.5×(ΔA+0.0004)÷ Cpr 3、按樣本質(zhì)量計(jì)算: 定義:45℃下,每克組織每分鐘催化產(chǎn)生 1 nmol 對(duì)硝基*酚(PNP)為一個(gè)酶活單位。 β-木糖苷酶活性(nmol/min/g 鮮重)=(ΔA+0.0004)÷0.0211÷(V1÷V×W)÷T =39.5×(ΔA+0.0004)÷W 4、按細(xì)胞數(shù)量計(jì)算: 定義:45℃下,每 104個(gè)細(xì)胞每分鐘催化產(chǎn)生 1 nmol 對(duì)硝基*酚(PNP)為一酶活單位。 β-木糖苷酶活性(nmol/min/104cell)=(ΔA+0.0004)÷0.0211÷(V1÷V×細(xì)胞數(shù)量)÷T =39.5×(ΔA+0.0004)÷細(xì)胞數(shù)量 5、按液體體積計(jì)算: 定義:45℃下,每毫升液體每分鐘催化產(chǎn)生 1 nmol 對(duì)硝基*酚(PNP)為一個(gè)酶活單位。 β-木糖苷酶活性(nmol/min/mL)=(ΔA+0.0004)÷0.0211÷V1÷T =39.5×(ΔA+0.0004) V---加入提取液體積,1mLV1---加入反應(yīng)體系中樣本體積,60μL=0.06mLW---樣本質(zhì)量,g; 500---細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù),500 萬; T---反應(yīng)時(shí)間,20min; PNP 對(duì)分子質(zhì)量---139.11。 Cpr---樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL,建議使用本公司的 BCA 蛋白含量檢測(cè)試劑盒; 附:標(biāo)準(zhǔn)曲線制作過程: 1 制備標(biāo)準(zhǔn)品母液(1mg/mL):向標(biāo)準(zhǔn)品 EP 管里面加入 1ml 蒸餾水。 2 把母液稀釋成以下濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)品:0, 0.05, 0.1, 0.15, 0.2, 0.25 mg/mL。也可根據(jù) 實(shí)際樣本來調(diào)整標(biāo)準(zhǔn)品濃度。 3 EP 管加入:60μL 標(biāo)準(zhǔn)品+75μL 蒸餾水+105μL 試劑二+540μL 試劑三,混勻,取 全部澄清液體轉(zhuǎn)移至 1mL 玻璃比色皿中,于 405nm 下讀取吸光值。 4 根據(jù)結(jié)果制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。



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