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還原糖含量試劑盒
還原糖含量試劑盒
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更新時(shí)間:2024-06-13 10:41:53瀏覽次數(shù):204

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【簡單介紹】
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還原糖含量試劑盒
還原糖廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中。植物體內(nèi)的還原糖主要包括葡萄 糖、果糖和麥芽糖等,是最常見的單糖和雙糖。

還原糖含量試劑盒

本試劑盒僅供科研使用 1 還原糖含量試劑盒說明書 (貨號:WS2050F 分光法 48 樣) 一、產(chǎn)品簡介: 還原糖廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中。植物體內(nèi)的還原糖主要包括葡萄 糖、果糖和麥芽糖等,是最常見的單糖和雙糖。 在堿性條件下,DNS 試劑與還原糖共熱生成棕紅色氨基化合物,經(jīng)過 480nm 540nm 波長掃描發(fā)現(xiàn)在 500nm 有特征吸收峰;在一定的濃度范圍內(nèi),還原糖含量與 500nm 吸光 度成線性關(guān)系,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線,即可求出樣品中還原糖的量。 二、測試盒組成和配制: 試劑名稱 規(guī)格 保存要求 備注 試劑一 液體 6mL×1 4℃保存 標(biāo)準(zhǔn)品 粉體 mg×1 4℃保存 若重新做標(biāo)曲,則用到該試劑 三、所需的儀器和用品: 可見分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、研缽、乙醇四、還原糖含量檢測: 建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測定,了解本批樣品情況,熟悉實(shí)驗(yàn)流程,避免實(shí)驗(yàn) 樣本和試劑浪費(fèi)! 1、樣本制備: ① 組織樣本: 稱取 0.1g 樣本(若是干樣,如烘干煙葉等可取 0.05g;若是水分充足的樣本可取 0.2g), 先加入 0.8mL 80%乙醇(自備:取 80mL 乙醇溶于 20mL 蒸餾水中),冰浴勻漿,倒入 有蓋離心管中,再用 80%乙醇沖洗研缽并轉(zhuǎn)移至同一 EP 管中,使 EP 管中粗提液終體積 定容為 1.5mL(若用自動研磨機(jī)可直接加入 1.5mL 80%乙醇研磨);置 50℃水浴 20min (封口膜纏緊,防止液體散失,且間隔 2min 振蕩混勻一次),冷卻后(若有損失,可加 80%乙醇補(bǔ)齊至 1.5mL),12000rpm,室溫離心 10min,取上清液備用。 【注】:若增加樣本量,可按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)15~10 的比例進(jìn)行提取 ② 液體樣本: 澄清的液體樣本直接檢測,若渾濁則需 12000rpm,室溫離心 10min,取上清液備用。 2、上機(jī)檢測1 可見分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上,調(diào)節(jié)波長至 500nm,蒸餾水調(diào)零。 2 調(diào)節(jié)水浴鍋至 95℃。 ③ 上清液稀釋:可先取 2 個(gè)樣本檢測,確定適合本批樣本的稀釋濃度 D:葉片類樣本可 稀釋 10 倍,含糖量高的果肉類樣本可稀釋 20 倍左右。 ④ 在 EP 管中加入下列試劑: 試劑(μL測定管 空白管(僅做一次) 樣本 100 蒸餾水 100 試劑一 100 100 混勻,在 95℃水浴中加熱 10min(蓋緊封口,防止水分散失), 取出后立即過冷水冷卻至室溫。 蒸餾水 1000 1000 混勻,全部液體轉(zhuǎn)移至 1mL 玻璃比色皿中,500nm 讀取吸光值 A, ΔA=A 測定-A 空白。 【注】:若ΔA 值大于 1.5,樣本可用蒸餾水再稀釋,稀釋倍數(shù) D 代入公式計(jì)算。本試劑盒僅供科研使用 五、結(jié)果計(jì)算: 1、 標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為 y =1.3936x-0.0296;x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(mg/mL),y 為吸光值ΔA。 2、按樣本重量計(jì)算: 還原糖(mg/g 重量)=[(ΔA+0.0296)÷1.3936×V1]÷(W×V1÷V)×D =1.076×(ΔA+0.0296)÷W×D 3、按質(zhì)量分?jǐn)?shù)(%)計(jì)算: 還原糖(%重量)=[(ΔA+0.0296)÷1.3936×V1]÷(W×V1÷V)×10-3× =[0.1076×(ΔA+0.0296)÷W×D]% 4、按液體體積計(jì)算: 還原糖(mg/mL)=(ΔA+0.0296)÷1.3936×D=0.7176×(ΔA+0.0296)×D V---樣品提取液總體積,1.5mL; V1---測定時(shí)所取樣本的體積,0.1mL; W---樣本質(zhì)量,g; D---自行稀釋倍數(shù),未稀釋即為 1。 附:標(biāo)準(zhǔn)曲線制作過程: 1 制備標(biāo)準(zhǔn)品母液(1mg/mL):從標(biāo)準(zhǔn)品管中稱量取出 2mg 至一新 EP 管中,再加 2mL 蒸餾水混勻溶解即 1mg/mL 的葡萄糖(母液需在兩天內(nèi)用且-20℃保存)。 2 把母液用蒸餾水稀釋成六個(gè)濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)品:0, 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1. mg/mL。也可 根據(jù)實(shí)際樣本來調(diào)整標(biāo)準(zhǔn)品濃度。 3 依據(jù)測定管的加樣表操作,根據(jù)結(jié)果即可制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。 2



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