| 上海宇淳生物科技有限公司
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| 參考價(jià) | ￥1030 |
-
型號
-
品牌
其他品牌 -
廠商性質(zhì)
經(jīng)銷商 -
所在地
上海市
| 96T | 1030元 | 1 盒 可售 |
更新時(shí)間：2024-06-13 10:33:43瀏覽次數(shù)：222
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甲酸脫氫酶(FDH)活性測定試劑盒,微板法
甲酸脫氫酶(FDH)活性測定試劑盒,微板法
本試劑盒僅供科研使用 1 甲酸脫氫酶(Formate dehydrogenase，FDH)試劑盒說明書 (貨號：WS5440W 微板法 96 樣) 一、產(chǎn)品簡介： 甲酸脫氫酶(FDH，EC 1. 2. 1. 2)屬于 D-2-羥基酸脫氫酶類，廣泛應(yīng)用于輔酶 NADH 的再 生中。 本試劑盒利用甲酸脫氫酶(FDH)催化甲酸和 NAD+不可逆反應(yīng)生成二氧化碳和 NADH，通 過檢測 NADH 在 340nm 的生成速率，進(jìn)而計(jì)算出甲脫氫酶(FDH)活性大小。 二、試劑盒組成和配制： 試劑名稱 規(guī)格 保存要求 備注 提取液 液體 100mL×1 瓶 4℃保存 試劑一 粉劑 mg×2 支 4℃保存 用前甩幾下或離心使試劑落入底 部，每支再加 0.6mL 蒸餾水溶解。 試劑二 粉劑 mg×2 支 4℃保存 用前甩幾下或離心使試劑落入底 部，每支再加 0.6mL 蒸餾水溶解。 試劑三 液體 20mL×1 瓶 4℃保存 三、所需的儀器和用品： 酶標(biāo)儀、96 孔板、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、研缽、冰和蒸餾水。 四、甲酸脫氫酶(FDH)活性測定： 建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個樣本做預(yù)測定，了解本批樣品情況，熟悉實(shí)驗(yàn)流程，避免實(shí)驗(yàn) 樣本和試劑浪費(fèi)！ 1、樣本制備： ① 細(xì)菌/培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù) 量（104個）：建議 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴， 功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）；12000rpm, 4℃離心 10min，取 上清，置冰上待測。 【注】：若增加樣本量，可按照數(shù)量（104 個）：提取液體積為 500~1000：1 的比例進(jìn)行提取 ② 液體樣本：直接檢測。若渾濁，離心后取上清檢測。 2、上機(jī)檢測： ① 酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 340nm。 ② 試劑解凍至室溫（25℃）或于 25℃水浴中孵育 10min； ③ 在 96 孔板中按照下表依次加入試劑： 試劑名稱（µL） 測定管 樣本 20 試劑一 10 試劑二 10 試劑三 160 混勻，立即于 340nm 處讀取 A1，35℃條件 下孵育 10min 后讀取 A2，ΔA＝A2-A1。 【注】：1. 若ΔA 過小如小于 0.01，可增加樣本體積 V1（如增至 40μL，則試劑三相應(yīng)減少）， 或延長反應(yīng)時(shí)間 T（如：30min）或增加樣本質(zhì)量 W（如增加為 0.2g），重新調(diào) 整后 V1 和 T 和 W 需代入公式重新計(jì)算。 2. 若ΔA 值大于 0.5 且 A2 值大于 1.5，需減少樣本體積 V1（如減至 5μL，則試劑 三相應(yīng)增加），或縮短反應(yīng)時(shí)間 T（如：2min 或更短），重新調(diào)整后的樣本體積 V1 和反應(yīng)時(shí)間 T 需代入計(jì)算公式重新計(jì)算。本試劑盒僅供科研使用 2 五、結(jié)果計(jì)算： 1、按樣本蛋白濃度計(jì)算： 酶活定義：每毫克組織蛋白每分鐘生成 1nmol NADH 的酶量為 1 個酶活單位。 FDH(nmol/min/mg prot)=[ΔA÷(ε×d)×109×V2]÷(V1×Cpr)÷T=321.5×ΔA÷Cpr 2、按細(xì)菌/細(xì)胞密度計(jì)算： 酶活定義：每一萬個細(xì)菌/細(xì)胞每分鐘生成 1 nmol NADH 的酶量為 1 個酶活單位。 FDH(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V2÷(ε×d)×109]÷(500×V1÷V)÷T=321.5×ΔA÷500 3、按液體體積計(jì)算： 酶活定義：每毫升液體樣本每分鐘生成 1nmol NADH 的酶量為 1 個酶活單位。 FDH 酶活(nmol/min/mL)=[ΔA×V2÷(ε×d)×109]÷V1÷T=321.5×ΔA V1---加入樣本體積，0.02mL； V---加入提取液體積，1mL； V2---反應(yīng)體系總體積，2×10-4 L； d---96 孔板光徑，0.5cm； 500---細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，萬； W---樣本質(zhì)量，g； ε---NADH 摩爾消光系數(shù)，6.22×103 L/mol/cm； T---反應(yīng)時(shí)間，10min； Cpr---蛋白質(zhì)濃度，mg/mL，建議使用本公司的 BCA 蛋白含量檢測試劑盒。
